klf8在調(diào)控人骨肉瘤細(xì)胞增殖和細(xì)胞侵襲中的作用

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1、系、?考SOOCHOWUNIVERSITY博士專(zhuān)業(yè)學(xué)位論文論文題目KLF8在調(diào)控人骨肉瘤細(xì)胞增殖和______________細(xì)胞侵襲中的作用研究生姓名林峰指導(dǎo)教師姓名________________姚陽(yáng)_________專(zhuān)業(yè)名稱(chēng)________________腫瘤學(xué)_________研究方向____________骨肉瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制論文提交日期2015年3月蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研宄工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研宄成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書(shū)而使用過(guò)

2、的材料。對(duì)本文的研宄作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均己在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名：^^期：一之多蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國(guó)家圖書(shū)館、中國(guó)社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研宄所（含萬(wàn)方數(shù)據(jù)電子出版社)、中國(guó)學(xué)術(shù)期刊（光盤(pán)版）電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被査閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索。涉密論文口本

3、學(xué)位論文屬在____年_月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文口論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：日期KLF8在調(diào)控人骨肉瘤細(xì)胞增殖和細(xì)胞侵襲中的作用中文摘要KLF8在調(diào)控人骨肉瘤細(xì)胞增殖和細(xì)胞侵襲中的作用中文摘要骨肉瘤(osteosarcoma，os)是最常見(jiàn)的原發(fā)性惡性骨腫瘤，多發(fā)生于兒童和青少年發(fā)育時(shí)期。通過(guò)手術(shù)治療后，發(fā)生轉(zhuǎn)移的骨肉瘤病人的術(shù)后五年存活率普遍低于20%。骨肉瘤如果不及時(shí)治療，往往會(huì)在6至12個(gè)月內(nèi)通過(guò)血行轉(zhuǎn)移的方式發(fā)生肺轉(zhuǎn)移現(xiàn)象，這已經(jīng)成為骨肉瘤臨床觀察中，最為顯著的特征之一，也是影響病人預(yù)后的主要因素。KLF8(Krüppel-likefactor8)是KLF轉(zhuǎn)錄因子家族第一亞群的一

4、員。KLF家族在N末端均具有三個(gè)高度保守的鋅指蛋白結(jié)構(gòu)，可以特異結(jié)合富含GC的啟動(dòng)子區(qū)。KLF轉(zhuǎn)錄因子在人類(lèi)生長(zhǎng)發(fā)育以及各種疾病包括腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用。KLF8被發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)。KLF8是調(diào)控細(xì)胞周期的重要轉(zhuǎn)錄因子，其在致癌性轉(zhuǎn)化(oncogenictransformation)和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelialtomesenchymaltransition,EMT)中具有關(guān)鍵作用。雖然關(guān)于KLF8在腫瘤中的功能已有不少的研究，但KLF8在人骨肉瘤中的功能還未見(jiàn)詳盡報(bào)道。本研究的目的就是探討KLF8在Saos-2骨肉瘤細(xì)胞中尤其是細(xì)胞侵襲中的生物學(xué)作用。首先通

5、過(guò)RT-PCR(real-timePCR)和westernblotting實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)KLF8在骨肉瘤細(xì)胞系中的表達(dá)遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于正常成骨細(xì)胞中的表達(dá)，且惡性越高、侵襲性越強(qiáng)的細(xì)胞，KLF8的表達(dá)量越高。同時(shí)對(duì)骨肉瘤病理組織的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，骨肉瘤原發(fā)灶KLF8表達(dá)高于癌旁組織,但低于肺轉(zhuǎn)移灶。通過(guò)構(gòu)建沉默KLF8基因表達(dá)的shRNA慢病毒載體轉(zhuǎn)染入Saos-2細(xì)胞，以隨機(jī)合成的shRNA作為陰性對(duì)照，QRT-PCR及WB檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在高惡性骨肉瘤細(xì)胞系Saos-2細(xì)胞中成功沉默了KLF8基因的表達(dá)，顯著下調(diào)了KLF8的mRNA和蛋白水平。構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)KLF8-shRNA的Saos-2細(xì)胞，分析了KLF8基因

6、的沉默對(duì)骨肉瘤細(xì)胞系生長(zhǎng)增殖的影響。首先用MTT方法測(cè)定細(xì)胞增殖情況。同陰性對(duì)照細(xì)胞相比，shRNA-KLF8組的細(xì)胞數(shù)明顯少于陰性對(duì)照細(xì)胞，說(shuō)明KLF8的沉默抑制了細(xì)胞的增殖。平板克隆形成實(shí)驗(yàn)和軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)KLF8表達(dá)降低的細(xì)胞形成克隆數(shù)明顯少于對(duì)照細(xì)胞，說(shuō)明KLF8影響了細(xì)胞的群體依賴(lài)性和克隆形成能力。流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)KLF8的沉默使骨肉瘤細(xì)胞在G0/G1期停滯，且細(xì)胞凋亡率顯著提高。說(shuō)明KLF8對(duì)細(xì)胞增殖的影響是通過(guò)使細(xì)胞周期停滯和增加細(xì)胞凋亡兩方面來(lái)完成的。@通過(guò)Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)KLF8沉默后細(xì)胞侵襲能力的變化，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)KLF8的

7、沉默降低了細(xì)胞分解細(xì)胞基質(zhì)并侵襲到下層小室的能力。跟陰性對(duì)照比，遷移到下層小室的細(xì)胞明顯少于對(duì)照細(xì)胞，說(shuō)明KLF8的RNA干擾影響了骨肉瘤細(xì)胞的侵襲能力。I中文摘要KLF8在調(diào)控人骨肉瘤細(xì)胞增殖和細(xì)胞侵襲中的作用本研究顯示KLF8在骨肉瘤的發(fā)生以及細(xì)胞的侵襲性中具有重要的調(diào)控作用，并為KLF8在骨肉瘤治療中作為可能的藥物治療靶點(diǎn)提供了理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：骨肉瘤，KLF轉(zhuǎn)錄因子，KLF8，細(xì)胞侵襲IIKLF8在調(diào)