第二節(jié)、分子生物學常用研究技術 - 歡迎進入網(wǎng)絡教學綜合平臺

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1、分子生物學實驗指導第一節(jié)、實驗室規(guī)則及安全防護一、實驗室規(guī)則二、實驗室安全防護第二節(jié)、分子生物學常用研究技術一、核酸分離純化二、聚合酶鏈反應技術三、分子雜交技術四、分子克隆技術五、其它新技術第三節(jié)、常用儀器使用一、離心機二、分光光度計三、PCR儀第四節(jié)、如何撰寫實驗報告第五節(jié)核酸分離純化技術實驗一、基因組DNA的提取制備與檢測實驗二、總RNA的提取制備與檢測實驗三、質(zhì)粒DNA的提取制備與檢測第六節(jié)PCR技術實驗四、常規(guī)PCR技術實驗五、定量PCR技術第七節(jié)分子克隆技術實驗六、DNA的限制性酶切與電泳實驗七、凝膠中DNA片斷的純化回收實驗八、DNA連接實驗實驗九、感受

2、態(tài)細胞的制備實驗十、重組DNA轉(zhuǎn)化與籃白斑篩選第八節(jié)分子雜交技術實驗十一、Southern印跡雜交實驗十二、Northern印跡雜交實驗十三、Western印跡實驗十四、核酸原位雜交第九節(jié)綜合性實驗實驗十五、蛋白質(zhì)雙向電泳實驗十六、酵母雙雜交實驗實驗十七、RNA干擾實驗第一節(jié)、實驗室規(guī)則及安全防護一、實驗室規(guī)則1．每個同學都應該自覺遵守課堂紀律，維護課堂秩序，不遲到，不早退，不大聲談笑。2．實驗前認真預習實驗內(nèi)容，熟悉本次實驗的目的，基本原理，操作步驟，懂得每一步操作的意義和了解所用儀器的使用方法，否則不能開始實驗。3．實驗時要聽從指導老師的指導，嚴格認真地按規(guī)程進

3、行實驗，并注意與同組同學的配合。未經(jīng)許可，不得亂動實驗裝置、儀器以及電器設備等。4．實驗數(shù)據(jù)和現(xiàn)象應隨時記錄在專用的實驗記錄本上。實驗結(jié)束時，實驗記錄必須送指導老師審閱后方可離開實驗室；實驗報告應該當堂完成或在下次實驗開始前交給指導老師。5．保持臺面、地面、水槽內(nèi)及室內(nèi)整潔。精心愛護各種儀器，要隨時保持儀器的清潔。如發(fā)生故障，應立即停止使用并報告指導老師。完成實驗后應將器材洗凈，把器材、藥品歸放回原處，試管倒置于試管架中并排列整齊。按規(guī)定處理好廢物，廢液，做好清潔衛(wèi)生。器材、儀器如有損壞須立即報告指導老師并按學校規(guī)定進行適當比例賠償。6．按需要量取藥品及蒸餾水等各種

4、物品，注意節(jié)約。7．公用儀器，藥品用后放回原處。多取的藥品不得重新倒入原試劑瓶內(nèi)。公用試劑瓶的瓶塞要隨開隨蓋，不得混淆，更不能互相污染。嚴禁用口吸或用皮膚接觸有毒藥品與試劑。8．需交指導老師保存的樣品，藥品及其他物品都應加蓋，并標注自己的姓名，班級，日期及內(nèi)容物。9．廢液體可倒入水槽內(nèi)，同時放水沖走。含強酸，堿及有毒廢液應倒入廢液缸。廢紙屑及其它固體廢物和帶渣滓的廢物倒入廢品簍或廢品缸中，不能倒入水槽或到處亂扔。書包及實驗不需之物品放在規(guī)定處。10．實驗室內(nèi)嚴禁吸煙！不得將含易燃溶劑的溶液近火。對電爐等火源，嚴格做到：人在火在，人走火滅。乙醇、丙酮、乙醚等易燃品不能

5、直接加熱，并要遠離火源操作和放置。實驗完畢，應立即拔去電爐插頭和關好水龍頭，拉下電閘。漏電的設備一律不得使用。離開實驗室前應該檢查水、電、窗等是否關好。11．實驗室內(nèi)一切物品，未經(jīng)教師批準，嚴禁帶出室外。12．每次實驗課由班長或課代表負責安排值日生。值日生的職責是負責當天實驗室的衛(wèi)生、安全和其它服務性工作。二、實驗室安全防護實驗室是學校教學的重要科學基地，貯存有貴重的儀器和化學危險藥品等。為防止損失和產(chǎn)生事故，必須做好防盜、防火、防水、防毒和安全用電等工作。（一）防盜1．加強防衛(wèi)，經(jīng)常檢查，堵塞漏洞。2．非工作人員不得進入儀器室，室內(nèi)無人時隨即關好門窗。3．儀器室內(nèi)

6、不會客，不住宿，未經(jīng)領導同意，謝絕參觀。4．發(fā)生盜竊案件時，保護好現(xiàn)場，及時向領導、治安部門報告。（二）防火、防爆1．嚴禁在儀器室內(nèi)生火取暖。2．易燃、易爆的化學藥品要妥善分開保管，應按藥品的性能，分別做好貯藏工作，注意安全。3．做化學實驗時要嚴格按照操作規(guī)程進行，謹防失火、爆炸等事故發(fā)生。（三）防水1．實驗室的上、下水道必須保持通暢。2．冬季做好水管的保暖和放空工作，要防止水管受凍爆裂釀成水患。（四）防毒1．實驗室必須做好防毒工作，有毒物質(zhì)應妥善保管和貯藏，實驗后的有毒殘液要妥善處理。2．凡易燃、易毒、腐蝕劑等危險性藥品要設專柜單獨存放。要定期檢查，嚴格管理，做到

7、雙人管理、雙人收發(fā)、雙人領取、雙人記帳、雙人把鎖。3．實驗中嚴格遵守操作規(guī)程，制作有毒氣體要在通風櫥內(nèi)進行，保持實驗室內(nèi)通風良好。4．化學實驗室備有廢液缸，實驗室附近有廢液處理池，防止有毒物質(zhì)隨意排放。（五）安全用電1．實驗室電路及用電設施要定期檢修，保證安全，決不“帶病”工作。2．如有電器失火，應立即切斷電源，用沙子或滅火器撲滅。在未切斷電源前，切忌用水或泡沫滅火機滅火。3．遇有人身觸電事故，應立即切斷電源，及時進入人工呼吸，急送醫(yī)院救治。第二節(jié)、分子生物學常用研究技術一、核酸分離純化核酸分子是分子生物學技術所涉及的主要對象，核酸分離純化的質(zhì)量好壞直接關系到后