Ferroportin抑制肝細(xì)胞癌生長的機(jī)制研究

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1、分類號UDC博士學(xué)位論文密級Ferroportin抑制肝細(xì)胞癌生長的機(jī)制研究Ferroportininhibitshepatocellularcarcinomagrowthmechanismresearch作者姓名：學(xué)科專業(yè)：周鈞臨床醫(yī)學(xué)(外科學(xué))學(xué)院(系、所)：湘雅二醫(yī)院指導(dǎo)教師：鐘德許教授論文答辯日期絲!蘭：2：!弓答辯委員會主席中南大學(xué)二O一二年九月、叨鄉(xiāng)多P／U’L原創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了論文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其

2、他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得中南大學(xué)或其他單位的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我共同工作的同志對本研究所作的貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明。作者簽名：日期：塑蘭年上月』學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人了解中南大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并根據(jù)國家或湖南省有關(guān)部門規(guī)定送交學(xué)位論文，允許學(xué)位論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容，可以采用復(fù)印、縮印或其它手段保存學(xué)位論文。同時授權(quán)中國科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫》，并通過網(wǎng)絡(luò)向社會公眾提

3、供信息服務(wù)。作者簽名：導(dǎo)師簽名日期：聾當(dāng)二日博士學(xué)位論文中文摘要摘要目的：鐵是維持正常細(xì)胞功能必不可少的物質(zhì)。多種惡性腫瘤表現(xiàn)出對鐵的需求增加，可能是鐵可以作為某些蛋白質(zhì)的輔助因子參與維持細(xì)胞的生長和增殖。Ferroportin又被稱為溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族40成員1。Ferroportin主要表達(dá)在網(wǎng)狀造血系統(tǒng)、十二指腸、脾臟、肝臟、腎臟和心臟，胚胎外胚層也有表達(dá)。這些系統(tǒng)和鐵代謝密切相關(guān)。亞細(xì)胞定位表明，F(xiàn)erroportin主要表達(dá)在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)，包括肝細(xì)胞、腎小球上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、十二指腸上皮細(xì)胞。Ferropo

4、rtin主要功能為將細(xì)胞內(nèi)的鐵輸送到細(xì)胞外，參與鐵的吸收和維持鐵代謝的平衡。但Ferroportin只是負(fù)責(zé)將細(xì)胞內(nèi)的鐵輸送到細(xì)胞外，而細(xì)胞外的鐵進(jìn)入細(xì)胞則是其他蛋白質(zhì)負(fù)責(zé)。Ferroportin是體內(nèi)鐵代謝的關(guān)鍵所在，F(xiàn)erroportin的表達(dá)高低控制著細(xì)胞內(nèi)鐵水平的高低。Ferroportin表達(dá)水平受到至少三個機(jī)制調(diào)控：轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控；翻譯水平調(diào)控：蛋白水平調(diào)控，特異性的和鐵調(diào)素hepcidin結(jié)合，使ferroportin降解。其中hepcidin是目前唯一被證實(shí)的Ferroportin的配體，hepcidin

5、和Ferroportin結(jié)合后使ferroportin磷酸化而介導(dǎo)ferroportin內(nèi)化，并通過蛋白酶降解。肝細(xì)胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)是一種惡性程度很高的腫瘤，是嚴(yán)重威脅人類生命健康的惡性腫瘤之一。我國的肝細(xì)胞癌的發(fā)病率在惡性腫瘤發(fā)病率中排名第四，為每十萬人口約為23．5例，而死亡率居惡性腫瘤死亡率的第2位。加之HBV和HCV感染的不T博士學(xué)位論文中文摘要斷發(fā)展，HCC的發(fā)病率在西方國家也在不斷增長。到目前為止，很多研究均顯示HCC中存在許多基因畸變表達(dá)。Ferroporti

6、n在肝細(xì)胞高水平表達(dá)，肝臟又是鐵代謝的關(guān)鍵器官。本研究通過檢測臨床病例標(biāo)本中Ferroportin蛋白在肝細(xì)胞癌患者中的表達(dá)水平；進(jìn)一步通過細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗研究分析Ferroportin蛋白和肝癌細(xì)胞惡性行為的關(guān)系，同時通過分子生物學(xué)的實(shí)驗研究其具體分子機(jī)制；從而初步闡明Ferroportin蛋白在肝細(xì)胞癌發(fā)生發(fā)展過程中的機(jī)制及其意義。方法：采用免疫組織化學(xué)染色檢測60例HCC的在組織、癌旁肝組織和10例正常肝組織樣本中Ferroportin的表達(dá)水平及分析Ferroportion的表達(dá)水平與HCC患者臨床病理學(xué)特征的關(guān)

7、系。進(jìn)一步通過構(gòu)建穩(wěn)定過表達(dá)細(xì)胞株，提高了肝癌細(xì)胞株MHCC．97H的Ferroportin蛋白的表達(dá)；運(yùn)用生長曲線、MTT實(shí)驗、劃痕實(shí)驗、基質(zhì)膠侵襲實(shí)驗研究Ferroportin蛋白對高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，及采用熒光測量法檢測了Fe玎oportin對細(xì)胞可變鐵池(LIP)的影響。最后通過熒光定量PCR和Western．blot證實(shí)了Ferroportin在肝癌細(xì)胞中低表達(dá)的原因。結(jié)果：免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示：(1)Ferroportin在正常肝組織、癌旁組織的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜都表現(xiàn)出強(qiáng)陽性表達(dá)。而在大多數(shù)肝

8、細(xì)胞癌組織只有一小部分呈弱陽性。統(tǒng)計分析HCC組織內(nèi)的Ferroportin蛋白表達(dá)陽性率和評分分別為28．3％(17／60)、0．96+0．31；在癌旁組織中Ferroportin蛋白表達(dá)陽性率和評分分別為91．17％II博士學(xué)位論文中文摘要(55／60)、5．97+2．12；在正常肝組織中Ferroportin蛋白表達(dá)陽性率和