肺炎克雷伯菌產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶耐藥質(zhì)粒的檢測(cè)與研究

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1、廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文肺炎克雷伯菌產(chǎn)超廣譜β-內(nèi)酰胺酶耐藥質(zhì)粒的檢測(cè)與研究姓名：左斌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：呼吸內(nèi)科學(xué)指導(dǎo)教師：劉朝暉20070601￡塑匡蘭墮堡主堂堡壘皇￡塑絲墨墮絲塞重魚墮蘭墮塾!墮壟墮塾塑笙型蘭塑塑中英文對(duì)照縮寫詞英文全稱中文全稱ESBLsExtended—spectrumB—lactamases超廣譜p一內(nèi)酰胺酶DHPLCDenaturingHigh—performance變性高效液相色譜LiquidChromatographyKPKlebsiellapneumoniae肺炎克雷伯菌ECEscherichiacoli大腸埃希菌NCCLSNationalCo

2、mmitteeofClinical美國(guó)國(guó)家l瓶床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)LaboratoryStandards準(zhǔn)化委員會(huì)PCRP01ymerasechainreaction聚合酶鏈反應(yīng)DNADeoxyribonucleicacid脫氧核糖核酸BpBasepair堿基對(duì)dNTPDeoxynucleotidetriphosphates脫氧核苷三磷酸MDNAMarkerDNA分子量標(biāo)準(zhǔn)SecSecond秒MinMinutej子valvaline纈氨酸11eisoleucine異亮氨酸A1aalanine丙氨酸Thrthreonine蘇氨酸Argarginine精氨酸Cyscysteine半胱氨酸Leu

3、1eucine亮氨酸Ginglutamine谷氨酰胺Gluglutamicacid谷氨酸Serserine絲氨酸G1yglycine甘氨酸Lyslysine賴氨酸一l一廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文廣州地區(qū)肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs耐藥質(zhì)粒的檢測(cè)與研究肺炎克雷伯菌產(chǎn)超廣譜B一內(nèi)酰胺酶耐藥質(zhì)粒的檢測(cè)與研究研究生：左斌導(dǎo)師：劉朝暉教授中文摘要背景超廣譜B-內(nèi)酰胺酶(Extended—spectrump．1actamases，ESBLs)是由質(zhì)粒介導(dǎo)的能水解氧亞氨基內(nèi)酰胺及單環(huán)內(nèi)酰胺類抗生素的一類酶，是導(dǎo)致肺炎克雷伯菌等腸桿菌科細(xì)菌對(duì)第三代頭孢菌素發(fā)生耐藥的重要機(jī)制。產(chǎn)ESBLs菌株可以通過質(zhì)粒

4、或轉(zhuǎn)座子進(jìn)行傳播，易導(dǎo)致菌株之間傳播和院內(nèi)感染的爆發(fā)流行。近年來，產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌所致的院內(nèi)感染己呈世界性流行，成為急需解決的醫(yī)療事件和公共衛(wèi)生問題。由于不同的國(guó)家、地區(qū)、醫(yī)院使用抗菌藥物的不同，產(chǎn)ESBL肺炎克雷伯菌的檢出率、耐藥性及基因型也有所不同。不同的基因型ESBL因其活性位點(diǎn)不同，分解底物有所不同。了解本地區(qū)ESBLs基因流行情況對(duì)I臨床合理用藥、防止耐藥菌的產(chǎn)生具有重要的意義。測(cè)序是目前公認(rèn)的ESBLs基因分型的“金標(biāo)準(zhǔn)”，但儀器昂貴、操作繁瑣、費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不適合作為一種篩查的方法用于ESBL的分子流行病學(xué)監(jiān)測(cè)。變性高效液相色譜分析(denaturinghigh

5、performanceliquidchromatography,DHPLC)是在部分變性的條件下，異源雙鏈因錯(cuò)配區(qū)的存在，在色譜柱保留時(shí)間短于同源雙鏈，而先被洗脫出來，DHPLC具有簡(jiǎn)便快捷、準(zhǔn)確靈敏和高通量、自動(dòng)化的特點(diǎn)，被應(yīng)用于對(duì)已知或未知的基因突變、小片段插入或缺失等DNA序列變異的篩查。近年，國(guó)外學(xué)者運(yùn)用PCR-DHPLC技術(shù)對(duì)耐氟喹諾酮淋病雙球菌、耐喹諾酮金黃色葡萄球菌、耐喹諾酮腸道沙門氏菌、耐環(huán)丙沙星鼠疫耶爾森菌進(jìn)行分析，結(jié)果表明通過選擇合適的DHPLC分析條件如柱溫、緩沖液梯度、流速和洗脫時(shí)一2一廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文廣州地區(qū)肺炎克雷伯菌產(chǎn)ESBLs耐藥質(zhì)粒的檢測(cè)與

6、研究間等，可據(jù)DHPLC洗脫峰峰型和出峰時(shí)間檢測(cè)和辨別出耐藥菌株，是一種很有應(yīng)用前景的快速檢測(cè)方法。．第一部分：產(chǎn)ESBLs菌株的篩選和藥敏試驗(yàn)?zāi)康拇_定產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌及了解產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)常見抗生素的耐藥情況方法采用美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)推薦標(biāo)準(zhǔn)確定產(chǎn)ESBLs菌株；用紙片擴(kuò)散法測(cè)定產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)常見抗菌藥物的耐藥性，以大腸埃希菌ATCC25922、肺炎克雷伯菌ATCC700603為質(zhì)控菌。結(jié)果1．肺炎克雷伯菌中產(chǎn)ESBLs菌株的檢出率為29．8％(57／191)。產(chǎn)ESBLs菌株主要來源于呼吸內(nèi)科21．1％(12／57)，其次為老年病科19．3％(11／57

7、)、ICUl2．3％(7／57)、泌尿外科12．3％(7／57)、腦內(nèi)科7．0％(4157)、血液內(nèi)科3．5％(2／57)等。2．產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌對(duì)大部分B一內(nèi)酰胺酶、氨基糖苷類及喹諾酮類抗生素耐藥嚴(yán)重，其中對(duì)頭孢他啶、頭孢噻肟的耐藥率分別為61．4％和75．4％。半數(shù)以上的產(chǎn)ESBLs菌株對(duì)頭孢吡肟敏感，亞胺培南對(duì)其高度敏感。結(jié)論產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌對(duì)大部分B一內(nèi)酰胺類抗生素耐藥嚴(yán)重。第二部分：變性高效液相色譜檢測(cè)ESBLs的實(shí)驗(yàn)研究目的探討TEM型及SHV型最適的