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《盾葉薯蕷輻射株系抗氧化酶活性及薯蕷皂苷元含量分析》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、盾葉薯蕷輻射株系抗氧化酶活性及薯蕷皂苷元含量分析作者：謝彩俠1，祝俠麗，高山林，白雨，白雁【摘要】目的提高盾葉薯蕷藥材的品質。方法通過組織培養(yǎng)，對輻射誘變獲得的盾葉薯蕷株系進行了抗氧化酶活性及薯蕷皂苷元含量分析。結果經(jīng)誘變獲得的株系SOD、POD比活力和APX活性與對照株系相比差異很大，大部分輻射誘變株系薯蕷皂苷元含量都超過了對照株系，但試管苗與一年生苗薯蕷皂苷元含量相關性不明顯。結論經(jīng)誘導獲得的輻射誘變株系在清除活性氧能力及有效成分含量方面與對照表現(xiàn)出明顯差異，說明輻射誘變可以作為盾葉薯蕷優(yōu)良品種選育的途徑。【關鍵詞】盾葉薯蕷;輻射誘變;抗氧化酶活性;薯蕷皂
2、苷元 盾葉薯蕷D.zingibiernsisC.H.Wright.屬薯蕷科薯蕷屬根狀莖，又名黃姜、火頭根，其根莖內薯蕷皂素的含量一般為2%左右，是目前世界上最好的激素類藥源植物。同時具有清肺止咳、利濕通淋、通絡止痛、解毒消腫的功能，可治肺熱咳嗽、濕熱淋痛、風濕腰痛、癰腫惡瘡、跌打扭傷、蜂螯蟲咬;其水溶性甾體皂苷成分對心肌缺血、胸痹、高脂血癥等有明顯治療作用。8 盾葉薯蕷是我國特有資源植物，是世界上薯蕷皂素含量最高的種類，最高單株達到16.5%，超過了世界王牌-墨西哥小穗花薯蕷15%的紀錄。據(jù)調查我國10個省市都有盾葉薯蕷分布，其中湖北、湖南、陜西、四川分布最
3、為集中，目前在陜西安康地區(qū)、湖北鄖西地區(qū)、湖南安化地區(qū)、河南南陽地區(qū)都有一定規(guī)模的種植面積。實現(xiàn)人工栽培后，雖然解決了皂素供應問題，而原料依舊短缺，主要原因是產(chǎn)量低、皂素含量變化較大，質量難以控制。因此有必要進行品種選育和提純復壯的工作?！ 〖毎谡４x活動中和在不利的環(huán)境條件下均能產(chǎn)生活性氧。生物體經(jīng)過長期進化形成了完善和復雜的抗氧化保護系統(tǒng)來清除活性氧。但當產(chǎn)生的活性氧超出活性氧清除系統(tǒng)的能力時，就會產(chǎn)生氧化損傷，導致膜脂過氧化、堿基突變、DNA鏈斷裂和蛋白質損傷。因此，植物中清除活性氧能力的相關酶含量和活性的測定和篩選，在優(yōu)良品種選育中具有重要參考價值
4、。鑒于此，筆者利用組織培養(yǎng)技術進行了盾葉薯蕷輻射誘變育種，并對誘變株系葉片中超氧化物歧化酶(SOD)，抗壞血酸過氧化物酶(APX)，過氧化物酶(POD)3種抗氧化酶的活性及薯蕷皂苷元含量進行了分析，為盾葉薯蕷優(yōu)良株系的選育提供依據(jù)?！ ?材料與儀器與方法 1.1材料盾葉薯蕷愈傷組織在MS+BA0.05mg/L+PP3330.58mg/L培養(yǎng)基上分化的叢生牙作為幅射材料?！ ?.2儀器和試劑BECKMANDU-600分光光度計，水浴鍋，微量加樣器。酶提取液：pH7.5的0.05M的Tris-HCl緩沖液，PBSpH(7.0)，0.1mmol/LEDTA，0.1
5、mmol/LH2O2，0.5mmol/LASA，丙酮，SOD試劑盒(購于建成生物試劑研究所)。2方法 2.1輻照株系的建立用不同劑量的鈷60輻照盾葉薯蕷的叢生芽，30d后統(tǒng)計存活率，對存活芽進行擴大繁殖，并淘汰長勢較弱，生長畸形的植株?！ ?.2SOD，POD，APX活性的測定精密稱取生長30d的輻照株系與未輻照株系試管苗新鮮葉片1.0g，每份材料加5ml預冷的提取緩沖液(pH7.5的0.05mol/LTris-HCl緩沖液)及少量石英砂，置于冰浴中研磨后，4℃冷凍離心機6000r/min離心10min，上清液即為酶提取液。SOD活性按試劑盒說明書操作。PO
6、D總活力按文獻[1]的方法進行，酶的比活力用ΔOD470/(mg·min)(protein)表示。APX活性參照文獻[1]的方法，酶活單位定義為每小時氧化μmolASA的酶量為一個酶活單位。 2.3盾葉薯蕷試管苗薯蕷皂苷元含量分析[2，3]盾葉薯蕷試管苗在MS/2+IAA0.2mg/L+NAA0.28mg/L培養(yǎng)基上誘導生根，待苗長至30～35d左右，洗凈根上的培養(yǎng)基，將根剪掉，在60℃下烘干，粉碎，過60目篩，供含量分析用?！ ?.3.1薯蕷皂苷元的測定供試品溶液制備：精密稱取盾葉薯蕷粉末0.7～1.0g，置于三角瓶中，加2.0mol/L的硫酸50ml，在
7、100℃水浴鍋中水解4h，放冷過濾，藥渣用蒸餾水洗至中性，60℃干燥后，用石油醚(60～90℃)50ml在90℃水浴中索氏提取5h，提取液回收至干后用無水乙醇溶解，過濾至5ml的容量瓶中，用無水乙醇定容待測定。對照品溶液制備：準確稱取薯蕷皂苷元標樣0.001g，置2ml容量瓶中，用無水乙醇溶解，稀釋至刻度，得0.5μg/μl的標準溶液備用。 2.3.2色譜條件選擇儀器：Agilent1100Series 分析條件：Microsorb-MV100C18(5μm，4.6mm×250mm)。無水甲醇為流動相，進樣量20μl，流速0.5ml/min，檢測波長203
8、nm,柱溫為室溫。樣品中薯蕷皂苷元與其
