資源描述：
《血管生成素1在體外對(duì)人胃癌細(xì)胞生物學(xué)作用的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、血管生成素-1在體外對(duì)人胃癌細(xì)胞生物學(xué)作用的研究【摘要】目的：探討人血管生成素-1(Ang1)及其與血管內(nèi)皮生長因子165(VEGF165）共同作用對(duì)人胃癌細(xì)胞的生物學(xué)作用,研究其在腫瘤發(fā)生中的作用機(jī)制。方法：應(yīng)用復(fù)制缺陷型腺病毒（Ad）-綠色熒光蛋白（GFP）、Ad-Ang1、Ad-VEGF165和Ad-Ang1+Ad-VEGF165/2轉(zhuǎn)染人胃癌細(xì)胞株MGC-803，使用MTT比色法分析它們對(duì)胃癌細(xì)胞增殖的影響；通過流式細(xì)胞儀分析血漿饑餓時(shí)其對(duì)凋亡的影響；使用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)Ki-67的表達(dá)；應(yīng)用RT-PCR方法半定量檢測(cè)bcl-
2、2mRNA、baxmRNA的表達(dá)情況。結(jié)果：MTT結(jié)果顯示24、48和72hAd-Ang1轉(zhuǎn)染組、Ad-VEGF165轉(zhuǎn)染組和Ad-Ang1+Ad-VEGF165/2轉(zhuǎn)染組吸光度均明顯高于Ad-GFP組及對(duì)照組(P<0.05)；Ad-GFP組與對(duì)照組相比無顯著差異(P>0.05)；Ad-Ang1+Ad-VEGF165/2轉(zhuǎn)染組吸光度明顯高于Ad-Ang1轉(zhuǎn)染組和Ad-VEGF165轉(zhuǎn)染組(P<0.05)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示Ad-Ang1、Ad-VEGF165及Ad-Ang1+Ad-VEGF165/2處理組與對(duì)照組及
3、空轉(zhuǎn)染組相比均能夠顯著抑制細(xì)胞凋亡(P<0.01)。免疫細(xì)胞化學(xué)法顯示各轉(zhuǎn)染組Ki-67表達(dá)強(qiáng)度均顯著高于對(duì)照組和Ad-GFP組(P<0.01)。RT-PCR結(jié)果顯示bcl-2mRNA在各轉(zhuǎn)染組中的表達(dá)要明顯高于對(duì)照組(P<0.05)；baxmRNA在各轉(zhuǎn)染組中的表達(dá)要明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。結(jié)論：Ang1、VEGF165和Ang1+VEGF165/2能夠明顯促進(jìn)人胃癌細(xì)胞MGC-803增殖，抑制血漿饑餓時(shí)的凋亡，Ang1+VEGF165/2組的作用要顯著強(qiáng)于Ang1組和VEGF165組。14【關(guān)鍵詞】血
4、管生成素-1；血管內(nèi)皮生長因子165；Ki-67；胃癌；增殖；凋亡血管生成素1（angiopoietin-1,Ang1）被發(fā)現(xiàn)在腫瘤的轉(zhuǎn)移、血管生成和腫瘤的侵襲中發(fā)揮重要作用，目前研究較多集中于其對(duì)腫瘤血管生成的作用上。Ang1是否能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞產(chǎn)生作用，以及Ang1和血管內(nèi)皮生長因子165（VEGF165）是否能夠協(xié)同作用于腫瘤細(xì)胞，目前并無相關(guān)研究。本實(shí)驗(yàn)以腺病毒為載體，將Ang1、VEGF165轉(zhuǎn)染至人胃癌細(xì)胞株MGC-803，研究其對(duì)胃癌細(xì)胞株體外增殖和凋亡的影響。1材料和方法1.1材料人胃腺癌細(xì)胞株MGC-803購自中國科學(xué)院
5、，復(fù)制缺陷型腺病毒（Ad）重組體Ad-Ang1、Ad-VEGF165及對(duì)照病毒Ad-綠色熒光蛋白（GFP）由南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院構(gòu)建并贈(zèng)送，AnnexinⅤ-FITC/PI試劑盒購自BenderMedsystems公司。141.2方法1.2.1細(xì)胞培養(yǎng)MGC-803細(xì)胞用含有10％胎牛血清的1640培養(yǎng)液于37℃、5%CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含100U·ml-1青霉素和鏈霉素。1.2.2MTT法測(cè)定Ad-Ang1、Ad-VEGF165以及Ad-Ang1+Ad-VEGF165/2對(duì)MGC-803細(xì)胞增殖的影響實(shí)驗(yàn)分對(duì)照組(正常細(xì)
6、胞組)、Ad-GFP組(平行對(duì)照組)、Ad-Ang1組(Ang1轉(zhuǎn)染組)、Ad-VEGF165組(VEGF165轉(zhuǎn)染組)、Ad-Ang1+Ad-VEGF165/2組(Ang1、VEGF165聯(lián)合轉(zhuǎn)染組)5組，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。取對(duì)數(shù)生長期的MGC-803細(xì)胞，以8000個(gè)·孔-1接種細(xì)胞于96孔培養(yǎng)板中，細(xì)胞生長度達(dá)60%～70%時(shí)對(duì)Ad-GFP、Ad-Ang1和Ad-VEGF165等3組予相應(yīng)的無血清無抗生素培養(yǎng)液稀釋的病毒液100μl感染，Ad-Ang1+Ad-VEGF165/2組加入相應(yīng)的無血清無抗生素培養(yǎng)液稀釋的病毒液50μl感染
7、，感染8h后換RPMI1640完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，對(duì)照組加入無血清的RPMI1640培養(yǎng)液。分別于感染后24、48、72h測(cè)定每孔吸光度(A值)，以空白對(duì)照孔的A值調(diào)零。1.2.3流式細(xì)胞儀檢測(cè)轉(zhuǎn)染Ang1、VEGF165、Ang1+VEGF165/2對(duì)MGC-803凋亡的影響將MGC-803以1.0×105個(gè)·孔-1接種于6孔板，實(shí)驗(yàn)分組同“1.2.2”，每組設(shè)3個(gè)復(fù)孔。感染814h后用無血清培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)48h后收集對(duì)照組、Ad-GFP組、Ad-Ang1組、Ad-VEGF165組和Ad-Ang1+Ad-VEGF165/2組的MGC-
8、803細(xì)胞，1000r·min-14℃離心10min，棄上清，加入1ml冷的PBS，輕輕震蕩使細(xì)胞懸浮，1000r·min-14℃離心10min，棄上清，重復(fù)用冷的PBS洗兩次。將細(xì)胞重懸于200μl結(jié)合緩
