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1、齒瓣石斛多糖提取及脫蛋白工藝研究作者：趙俊凌，馬潔，李戈，段立勝【摘要】目的通過正交實驗對齒瓣石斛多糖的提取工藝、脫蛋白條件進行優(yōu)化研究。方法采用苯酚-硫酸法考察提取溫度、提取時間及溶劑體積等因素對多糖提取的影響,采用比色法考察樣品與萃取劑體積比、萃取劑體積比、振蕩時間等因素對多糖脫蛋白的影響。結果多糖提取的最佳條件，提取溫度100℃，提取時間2h，加水量200ml，提取2次，醇沉濃度為80%，醇沉時間30h;多糖脫蛋白的最佳條件，樣品/萃取劑(V/V)為4∶1，氯仿/正丁醇(V/V)為4∶1，萃取時間30min。結論苯酚
2、-硫酸法簡單，易操作，可測定齒瓣石斛中多糖含量?！娟P鍵詞】齒瓣石斛;多糖;提取工藝;脫蛋白;正交實驗石斛屬Dendrobium是蘭科中的第二大屬，全球共有約一千五百多種，主要分布于亞洲的熱帶和太平洋島嶼的東亞、東南亞及澳大利亞等地區(qū)，我國有76種(74個種，2個變種)10主要分布于華南及西南地區(qū)。石斛作為一種名貴中藥被《本草綱目》收錄，在《神農(nóng)本草經(jīng)》中也被列為上品，其有養(yǎng)胃生津、滋陰清熱、明目的功能,用于陰傷津虧,口干煩渴,食少干嘔,病后虛熱,目暗不明等癥狀?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)石斛屬植物具有抗腫瘤、免疫調節(jié)、抗氧化、抗血小
3、板聚集、擴張血管、降低血糖等多種活性[1]，同時在治療胃腸道疾病和治療白內障方面也有很好療效?！ ↓X瓣石斛DendrobiumdevonianumPaxt為石斛屬植物，又名紫皮石斛或紫皮蘭，主要分布于我國的云南、廣西、貴州等省，緬甸、越南、老撾、泰國也較多，具有“滋陰益胃，生津止渴”之功效。我國及許多其它亞洲國家一直把齒瓣石斛的莖當作生產(chǎn)楓斗的原料,主要用其當年生的幼嫩莖加工生產(chǎn)紫皮楓斗、細黃草，或者替代緊缺的鐵皮石斛生產(chǎn)鐵皮楓斗，產(chǎn)品銷售國內外，深得國內外消費者的青睞，其價格和質量僅次于鐵皮石斛。近年來其價格呈上升趨勢，
4、鮮品價格已達160元/kg，而紫皮楓斗的價格也達到2000～4000元/kg[2]。 國內外對齒瓣石斛的藥理和化學成分的研究都相對較少。李滿飛等[3]報道了用比色法測定石斛多糖時測定了齒瓣石斛，其多糖含量為21.09%;熊麗萍等[4]報道了紫皮石斛14.27%,其水體液對超氧陰離子有抗氧化作用;吳剛等[5]報道了云南文山產(chǎn)齒瓣石斛的多糖含量37.05%;黎英等[6]報道了齒瓣石斛的水提物具有清除活性氧的活性;鄭志新等[7]報道了齒瓣石斛含有石斛多糖、礦質元素、氨基酸等有效成分。目前以齒瓣石斛(紫皮石斛)為主的產(chǎn)品較單一，
5、具有很大的市場潛力。本實驗對齒瓣石斛多糖的提取及純化工藝進行研究，為齒瓣石斛開發(fā)利用提供參考?！ ?材料與儀器10 1.1材料齒瓣石斛Dendrobiumdevonianum產(chǎn)地為云南省，由中國醫(yī)學科學院藥用植物研究所云南分所王云強助理研究員鑒定?！ ?.2試劑與儀器苯酚、濃硫酸、石油醚、無水乙醇、氯仿、正丁醇、丙酮、乙醚等均為分析純。旋轉蒸發(fā)器R-210(瑞士布奇)，TU-1901新世紀紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責任公司)，數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-4(常州國華電器有限公司)，GZX-9140恒溫數(shù)顯鼓風干燥箱
6、(上海博訊設備有限公司)，METTLERTOLEDO系列分析天平AB135-S，PL203?！ ?方法與結果 2.1標準溶液配制[3]精密稱取105℃干燥恒重的標準葡萄糖100.0mg，置100ml容量瓶中，加蒸餾水適量使溶解，稀釋至刻度，搖勻。精密吸取10ml置100ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，每毫升含葡萄糖0.1mg。 2.2檢測波長的選擇精密吸取標準葡萄糖溶液0.3ml，置于具塞比色管中，加蒸餾水至2.0ml，再加苯酚試液1.0，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0ml，蓋好塞子，迅速搖勻，放置5min，置沸水浴中加
7、熱15min，取出，冷水迅速冷卻至室溫，作為供試溶液。另以2.010ml蒸餾水同樣操作，作為空白對照，在400～600nm范圍對供試溶液進行掃描。葡萄糖溶液在490nm波長處有最大吸收度,齒瓣石斛多糖溶液在490.50nm波長處有最大吸收度,故選490.50nm作為樣品的測量波長。 2.3標準曲線制作精取葡萄糖對照液，0.1，0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7ml，分別加入具塞比色管中，加蒸餾水使成2.0ml，各加苯酚試劑1.0ml，在旋轉混勻器上搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0ml，搖勻，放置5min，置沸水浴中
8、加熱15min，冷水迅速冷卻至室溫。另以蒸餾水2.0ml同法操作，作為空白對照，在490nm處測其吸收度。以吸收度值為Y,葡萄糖濃度為X，得回歸方程：Y=0.00811+0.01731X，r=0.9995，說明該工作曲線在5.00～35.00μg間的線性良好?！ ?.4精密度實驗精取供試溶液5份，每份0
