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《新的白血病相關(guān)基因LRP15的克隆及其功能的初步研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院碩士學(xué)位論文新的白血病相關(guān)基因LRP15的克隆及其功能的初步研究姓名：徐周敏申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：血液內(nèi)科指導(dǎo)教師：于力;樓方定2003.6.1麟漱軍總暇院軍羼避謬學(xué)院硬士論史英文鳙略語焚文縮寫CRRLGSEST姒e囂pCR掛{GSSAG萎蠢GFPA灝LALLC燃LCLLRT-PeR獬S-Pe驍CdR彳SAK562嬲DSNPBN8鹺Np8S_c!葵文奎稱CompleteRemissionRestrictionLandmarkGenomicScanningExpressionSequenceTagsRapidAm
2、plificationofeDNA_EndPolymerasechainreactionhi酶throughgenomicsequenceserialanalysisgeneexpressionenhancedgreenfluorescentproteinAcuteMyeloblastieLeukemiaAcuteLymphoblasticLeukemiaChronicMyelogenousLeukemiaChronicLymphocyticleukemiareversetranscriptasePCRmethylationspecial
3、PCR5-aza-2'-deoxycytidine碰chostminmyelodysptasticsyndromnormalperipheralbloodnorrnalbonemarrownormalperipheralbloodstemcell4中文全摶完奎緩解阻裁撼路靜基鰻媳婦磁表逸序列標(biāo)簽eDNA來稿快速擴(kuò)罐聚合酶鼴反應(yīng)高通贊丞菠紐旁魏基瓣表述串行分析增強(qiáng)琢色熒覓蛋白急蛙髓細(xì)胞掛由矗羯急性淋＆細(xì)胞性白血癌瞧蛙穗圣毽跑瞧套盎褊慢性淋巴細(xì)胞牲白焱蠛逆轉(zhuǎn)慕聚合贛鍵反應(yīng)節(jié)基他糖暑PCRS嗓氯一2’．勰氧瓞嘧啶曲古抑蒸素急撼奴白血病細(xì)胞系毽'
4、髓秀磐增生綜合蘞正常外輿血正常蚤髓蠢常鈴躦血于垂瓣絕竺苧羔璺堡些蘭墾堂竺蘭墮．一———————竺：蘭堅(jiān)耪磚白血病犧熒基因LRPl5的克隆及其功能的初步研究中文摘要急性白血病的發(fā)生包括了復(fù)雜的基因突變、缺失、癌基因激活及抑癌基因失活等多種分子斑物學(xué)水平的異常，尋找新的白贏病相關(guān)基因一點(diǎn)是這一領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，不僅有助于闡明白贏病發(fā)生發(fā)展的機(jī)制，而且可能找到一些治療犯位點(diǎn)。為克隆與白血病復(fù)發(fā)相熒的新基因(LRFl5)的全長(zhǎng)cDNA序列，我們應(yīng)用先選的分子生物學(xué)及生物信息學(xué)援拳對(duì)一段已知僅在白焱病復(fù)發(fā)標(biāo)本中彼甲基化的1．8kb長(zhǎng)的DNA片段進(jìn)行研
5、究分析，通過在美國(guó)生物信息中心《NCBD捉供題bEST數(shù)據(jù)霹q-電子雜交秀霹相互露疊黷EST冀段緞裝、設(shè)骨；；物進(jìn)行cDNA末端快速擴(kuò)增。以高通量熬因組序列(HTGS)數(shù)據(jù)庫及SAGE交庫為基菇，將獲得磚cDNA矗段透行染色體定位及紐織表這分析。結(jié)慕克隆到了LRPl5基因的全長(zhǎng)cDNA序列(1718bp)，含一個(gè)780bp的開放讀碼框架，編碼259個(gè)氨基酸，定位于染色體3p24，在多種組織中表達(dá)。為避一步研究該隳因的功能奠定了基礎(chǔ)。通過對(duì)新基因的生物信息學(xué)分析，表明LRPl5基因是一個(gè)與人類急性白焱病及其純髀瘤發(fā)生，發(fā)筑密切魏是的基爨。為
6、透一步溺姨麓基翳LRPl5編碼蛋白質(zhì)的功能，確定編碼蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位。我們利用生物信息學(xué)方法，以人類基囂經(jīng)資源(HGR)數(shù)據(jù)庫為基硪，進(jìn)行LRPl5啟動(dòng)子熬靖征分櫥。在Prosite數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行有生物學(xué)意義的保守性氨基酸修飾位點(diǎn)搜索。通過RPS．BLAST程序預(yù)測(cè)英簧白質(zhì)鰓構(gòu)及功能。以增強(qiáng)綠色焚光蛋白(EGFP)為報(bào)告基因，利用激光共聚焦顯微鏡等實(shí)驗(yàn)方法驗(yàn)證生物信息學(xué)的分析結(jié)果。結(jié)采表明，LRPl5編碼蛋白舍有cAMP依賴的蛋白激酶磷酸化位點(diǎn)及酪蛋白激S鬃藏軍總囂藐軍醫(yī)遺摻擎貔碩士論又酶lI磷酸化位點(diǎn)，其N端有一個(gè)富含亮氧酸重復(fù)序州。L
7、RPt5編碼蛋白定位于細(xì)胞核內(nèi)。提示LRPl5是一個(gè)糖蛋白因子，其功能可能是參與細(xì)胞的生長(zhǎng)分化，調(diào)節(jié)細(xì)胞屬擻，細(xì)l龜?shù)陌l(fā)-g調(diào)控或DNA修復(fù)。也從另一全側(cè)面證實(shí)了生物信息擎預(yù)測(cè)基因功能的真實(shí)性。為透一步從實(shí)驗(yàn)上證實(shí)該基菠麓表這是否與盤矗病摶發(fā)生發(fā)葳相關(guān)，我們選擇正常成人外周贏(NPB)、正常骨髓(NBM)、經(jīng)G—CSF動(dòng)員的正常外用血予鈿跑(NPBSC)、原代蠹焱病細(xì)跑及自血痛細(xì)胞系為研究對(duì)象，采用R．T-PCR方法分別檢測(cè)了LRPl5基因的表達(dá)水平；從研究白血病細(xì)胞系K562中LRpl5巖動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化狀況出發(fā)，應(yīng)用甲簇化抑制荊5
8、．象氮一2’．脫氧胞嘧啶(5-aza．2'-deoxycytidine、decitabine、CdR)及去乙耽化酶抑制到曲古拇葚密(Trichostatin，TSA)誘導(dǎo)CpG島去甲基化及組蛋
