雌黃(三硫化二砷)誘導(dǎo)HL60細(xì)胞凋亡與壞死的實驗研究

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1、雌黃(三硫化二砷)誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡與壞死的實驗研究【摘要】目的研究雌黃（As2S3）能否誘導(dǎo)急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株（HL-60）凋亡與壞死。方法以不同濃度的As2S3在不同的時間處理體外培養(yǎng)的HL-60細(xì)胞株，應(yīng)用細(xì)胞生長測定、形態(tài)學(xué)觀察及流式細(xì)胞儀檢測等多種方法，在體外研究As2S3對HL-60細(xì)胞凋亡和增殖抑制的作用。通過對細(xì)胞進(jìn)行AnnexinV和碘化丙錠（PI）雙重染色，應(yīng)用流式細(xì)胞儀可以區(qū)分活細(xì)胞、凋亡細(xì)胞與壞死細(xì)胞。結(jié)果2.5μmol/LAs2S3作用18h后誘導(dǎo)HL-60小部分細(xì)胞凋亡和大部分細(xì)胞壞死，7.5μmol/LAs2S3作用8h后可

2、引起HL-60細(xì)胞凋亡。結(jié)論As2S3可誘導(dǎo)HL-60細(xì)胞凋亡與壞死，有必要進(jìn)一步探索其對急性粒細(xì)胞白血病治療的價值?！娟P(guān)鍵詞】雌黃(三硫化二砷)；HL-60細(xì)胞；凋亡ExperimentalstudyonAs2S3(Orpiment)inducedapoptosisandnecrosisofhumanleukemiacelllineHL-60【Abstract】ObjectiveThecurrentstudywasdesignedtoinvestigatewhetherAs2S3(Orpiment)willinduceapoptosisandnecrosiso

3、fhumanacutemyloidleukemiacelllineHL-60.MethodsAcuteleukemiacelllineHL-60wasusedasinvitromodel.HL-608celllinewastreatedwithAs2S3atdifferentconcentrationsanddifferentperiod，andcellgrowthwasanalyzedwithtrypanblueexclusion.Apoptosiswasassessedwithcellmorphology（includingmicroscopeandelec

4、tronmicroscope）andflowcytometry，thelattercandistinguishlivecell，apoptoticcellandnecroticcellthroughdoublestainingofAnnexinVandpropidiumiodide，ofwhichfluorescentintensitiesweremeasuredonflowcytometry.Results2.5μmol/LofAs2S3couldinducemostofcellHL-60necrosisandasmallpartofcellapoptosis

5、within18h，7.5μmol/LAs2S3couldinduceapoptosisofhumanleukemiacelllineHL-60within8hours.ConclusionItisnecessarytostudyfurtherthetherapeuticvalueofAs2S3onacutemyloidleukemia.SinceitcaninduceapoptosisandnecrosisofHL-60cell.【Keywords】As2S3(Orpiment)；HL-60cell；Apoptosis8近年來對急性早幼粒細(xì)胞白血?。ˋPL）的

6、治療方面的有關(guān)研究取得了重大進(jìn)展，全反式維甲酸、三氧化二砷以及復(fù)方青黛片（主要成分為As4S4）對APL治療均有較高完全緩解率，尤其后兩者對APL治療作用，主要是通過凋亡來實現(xiàn)的［1］，因此誘發(fā)細(xì)胞凋亡已成為白血病治療的新思路。本研究旨在進(jìn)一步探索中藥雌黃(又稱黃砷，主要成分為As2S3)在體外對急性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞株HL-60的凋亡與壞死作用。1材料與方法1.1制劑As2S3（上?；瘜W(xué)試劑公司）配成500μmol/L的儲存液，過濾滅菌，4℃存放備用，臨用前稀釋成所需濃度。1.2細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞生長狀況測定HL-60細(xì)胞（由江蘇省血液研究所陳子興教授惠贈）細(xì)胞以

7、2×105/ml接種于RPMI1640培養(yǎng)液（10%胎牛血清，100U/ml青霉素和100mg/ml鏈霉素）中培養(yǎng)（37℃、5%CO2）。加藥后逐日取藥物處理組與對照組細(xì)胞臺盼藍(lán)染色，光鏡下計數(shù)活細(xì)胞總數(shù)連續(xù)6天，繪制生長曲線。1.2.1細(xì)胞形態(tài)觀察及流式細(xì)胞儀測定培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)3.0μmol/LAs2S3孵育一定時間后收集2×106細(xì)胞PBS洗2遍，1500r/min離心5min，棄上清，4℃2%戊二醛固定72h后，1%鋨酸固定，梯度脫水，EPON-812包埋，超薄切片，鈾和鉛雙重染色后透射電鏡下觀察。Annexin-V標(biāo)記按Immuno-tech公司的說明書進(jìn)行

8、，1×106細(xì)胞用冰PB