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《三氧化二砷與刺五加合用誘導(dǎo)hela細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、三氧化二砷與刺五加合用誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究【關(guān)鍵詞】三氧化二砷；,,刺五加；,,HeLa細(xì)胞；,,凋亡 摘要：目的探討三氧化二砷與刺五加合用對(duì)癌細(xì)胞生長的抑制作用及其機(jī)理。方法以HeLa細(xì)胞的生長抑制情況，流式細(xì)胞儀PI單染法檢測(cè)藥物誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡狀況。結(jié)果兩藥合用24h組細(xì)胞變小變圓，脫落情況都較其他組明顯，該組細(xì)胞生長抑制率明顯高于單用組，合用24h組細(xì)胞的凋亡率明顯高于合用16h和8h組（P＜0.01）。結(jié)論刺五加可以作為三氧化二砷的抗癌增效劑，兩藥合用有很強(qiáng)的抗癌活性，其作用機(jī)理與抑制癌細(xì)胞生長
2、、誘導(dǎo)其凋亡有關(guān)?！ ￡P(guān)鍵詞：三氧化二砷；刺五加；HeLa細(xì)胞；凋亡 ExperimentalStudyontheApoptosisofHeLaCellsInducedbyArsenicTrioxideandacanthopanaxsenticosus Abstract:ObjectiveToinvestigatetheanti-tumoreffectofArsenictrioxideandAcanthopanaxSenticosusoncarcinomacellsanditsprobablemechanism
3、.MethodsHeLacellsodel.HeLacellsstructuralchangeinedbyinvertedphasemicroscope.Theinhibitioneffectonthegroicroculturetetrazoliumassay(MTT).Theapoptosisofcellsetry(FCM).ResultsThecellsofthegroupoftedicinesusedtogetherturnedsmallerandrounderthanothergroups.Thegroe
4、dicinesusedtogether24hoursprovetheantitumoreffectsofArsenictrioxide,butorestudying. Keyl/支，黑龍江省珍寶島制藥有限公司）；亞砷酸注射液（規(guī)格10mg/10ml,哈爾濱伊達(dá)藥業(yè)有限公司）；四甲基偶氮唑鹽（MTT,Amresco公司）；RPMI1640培養(yǎng)基（美國GIBCO公司）；新生牛血清（杭州四季青生物制品公司）；酶標(biāo)儀（560型，美國BIORAD公司），流式細(xì)胞儀（FACScalibur型，美國BD公司）；數(shù)碼相機(jī)（日本C
5、anon公司）?！ ?.2細(xì)胞系HeLa細(xì)胞，為人宮頸癌細(xì)胞系，購自武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC）?！ ?.3藥用濃度的確定 1.3.1刺五加藥用濃度的確定采用MTT法，取對(duì)數(shù)生長期HeLa細(xì)胞，1×105/ml的細(xì)胞100μl至96孔培養(yǎng)板，加入等量不同濃度的刺加五溶液，使各組終濃度分別為0.1，0.5，1，1.5mg/ml，每個(gè)濃度組和對(duì)照組均設(shè)5個(gè)重復(fù)孔，以加細(xì)胞而不加藥物組為空白對(duì)照組。37℃，5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24h后，取出培養(yǎng)板，棄舊培養(yǎng)液，每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，3
6、7℃繼續(xù)培養(yǎng)4h，棄培養(yǎng)液，每孔加入DMSO150μl，振蕩15min，使結(jié)晶物充分溶解，最后在酶標(biāo)儀上用490nm波長測(cè)定各孔的OD值，計(jì)算細(xì)胞存活率和半數(shù)抑制濃度（IC50），從而確定刺五加的用藥濃度為0.5mg/ml。 1.3.2As2O3藥用濃度的確定參考 2結(jié)果 2.1細(xì)胞生長抑制率刺五加與As2O3合用對(duì)HeLa細(xì)胞增殖有顯著的抑制作用。結(jié)果見表1?！ ”?藥物對(duì)HeLa細(xì)胞的生長抑制率(略) c與b比較，P＜0.01，c與a比較，P＜0.01 2.2HeLa細(xì)胞的凋亡分別觀察藥物作用HeLa
7、細(xì)胞8，16，24h的凋亡情況，結(jié)果顯示兩藥合用能明顯誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡，且有明顯的時(shí)間依賴性（見表2），合用16，24h流式檢測(cè)出現(xiàn)明顯的凋亡峰。見圖1。 a對(duì)照組流式b兩藥合用24h凋亡c兩藥合用16h凋亡 圖1刺五加與As2O3合用誘導(dǎo)HeLaxl細(xì)胞凋亡的流式檢測(cè)圖(略) 表2藥物作用HeLa細(xì)胞不同時(shí)間的細(xì)胞凋亡率(略) c與相對(duì)應(yīng)時(shí)間a，b各組認(rèn)及生理鹽水組比較，P＜0.01；c24與c8，c16比較P＜0.01；b與相對(duì)時(shí)間a組和生鹽鹽組比較，P＜0.05 3討論 細(xì)胞凋亡（apopto
8、sis）是機(jī)體中普遍存在的重要的生物學(xué)事件，是受基因調(diào)控的主動(dòng)性死亡過程，其形態(tài)變化和生化特征明顯不同于細(xì)胞壞死，這種特殊的細(xì)胞死亡方式對(duì)機(jī)體發(fā)育和正常功能的維持有重要意義，而腫瘤的發(fā)生發(fā)展不僅與腫瘤細(xì)胞增殖異常有關(guān)，也與腫瘤細(xì)胞凋亡異常有密切關(guān)系。大量的研究表明，抗腫瘤藥物的一個(gè)重要作用機(jī)理是誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡［2］。因此，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡已成為抗癌藥物
