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《蕎麥多肽的制備及其抗氧化活性的研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、萬(wàn)方數(shù)據(jù)萬(wàn)方數(shù)據(jù)※工藝技丕受品照學(xué)2堂場(chǎng)f．27，№．JD3∞本研究以多肽濃度和水解度(DH)作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，擬將苦蕎麥蛋白采用蛋白酶水解成為低分子量的苦養(yǎng)麥多肽，并對(duì)其抗氧化活性進(jìn)行研究。研究采用木瓜蛋白酶、Protamex酶、A1calase酶、Flavourzvme蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶對(duì)苦蕎麥蛋白進(jìn)行酶解效果的對(duì)比，并研究了超聲波預(yù)處理對(duì)酶解效果的影響，從而確定出酶法制備苦蕎多肽的最佳工藝條件；并采用亞油酸．硫氰酸鐵法測(cè)定各種酶酶解后制得的蕎麥多肽液在脂類中的抗氧化活性。1材料與方法1．
2、1材料與儀器養(yǎng)麥復(fù)合蛋白自制：Flavourzyme復(fù)合風(fēng)味蛋白酶(酶活力l596U／mg)、Neutrase中性蛋白酶(酶活力為944U／mg)、AlcalaseFoodGrade水解蛋白酶(酶活力為13981U／mg)、Protamex復(fù)合酶(酶活力10677U，mg)NOVO公司；木瓜蛋白酶(酶活力為849U／mg)Enzybel公司；L一酪氨酸(BR)、亞油酸Sigma公司；茚三酮、四肽標(biāo)準(zhǔn)物(BR)國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。754型分光光度儀上海箐化科技儀器有限公司；TL．18M型臺(tái)式高速冷凍離
3、心機(jī)上海市離心機(jī)械研究所：VC750型超聲波儀(額定功率750W)SONICSandMATERIALS．INC；R型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上海申生科技有限公司。1．2酶解液多肽濃度的測(cè)定1．2．1多肽標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制稱取Gly—Gly一．Ib-A唱標(biāo)準(zhǔn)物0．50009，溶解并用50IIll容量瓶定容至50ml，即10mg／ml，分別吸取O、0．2、O．4、0．6、0．8、1．0、1．2、1．4、1．6、1．8ml標(biāo)準(zhǔn)溶液于試管中，加水補(bǔ)足6ml，各加入雙縮脲試劑4ml，混合搖勻后，在室溫的條件下放置30min后，采用7
4、54型分光光度計(jì)測(cè)定光密度(540nm)。根據(jù)光密度值與多肽濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。1．2．2酶解液多肽濃度的測(cè)定吸取酶解液4m1，加入lml10％TCA溶液，沉淀酶解液中的大分子蛋白質(zhì)及大分子物質(zhì)，然后以3000r，min離心沉淀10min，然后吸取上清液1ml，加入5ml水，再加入4m1雙縮脲試劑，混合搖勻后，在室溫的條件下放置30min后，用754型分光光度計(jì)進(jìn)行光密度測(cè)定(540Ⅱm)。同時(shí)做空白。酶解液多肽濃度是根據(jù)光密度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的毫克數(shù)，再乘以稀釋倍數(shù)得出。1．3酶解液．NH：的測(cè)定1．3．
5、1酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制稱取0．05009酪氨酸(BR)溶解并定容成50ml，所得濃度為1mg／ml，分別吸取0、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0、1．2、1．4ml標(biāo)準(zhǔn)溶液于試管中，加水補(bǔ)足4ml，加入pH8．0的緩沖液1ml，再加入1ml1．5％茚三酮溶液，然后在沸水浴中水浴加熱l5min后取出，并冷卻至室溫，用比色管定容至50ml，再用754型分光光度計(jì)進(jìn)行光密度測(cè)定(570nm)。根據(jù)光密度值與酪氨酸濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。1．3．2苦蕎麥復(fù)合蛋白酸解液．NHz總量的測(cè)定稱取1．37119苦蕎麥復(fù)合
6、蛋白，加入6m01幾的鹽酸100ml，放入85℃的恒溫干燥箱中，加熱消化24h，取出冷卻，過(guò)濾除去不溶物，然后用真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至10“，用40％Na0H調(diào)pH值至中性，定容至100IIll，此即為酸解原液。吸取10．Oml原液，定容至50ml，即為1：5稀釋液，吸取稀釋液1“于試管中，加水補(bǔ)足4rnl，加入pH8．0的緩沖液1IId，再加入1Inl1．5％茚三酮溶液，然后在沸水浴中水浴加熱15min后取出，并冷卻至室溫，用比色管定容至50ml，再用754型分光光度計(jì)進(jìn)行光密度測(cè)定(570nm)，同時(shí)做
7、空白。1．3．3酶解后多肽液中．NH：總量的測(cè)定吸取4ml酶解后多肽液，加入1m110％TCA，沉淀酶解后多肽液中的大分子蛋白質(zhì)和大分子物質(zhì)，然后以3000r，min離心沉淀10min，再吸取上清液1ml，加水補(bǔ)足4ml，加入1mlpH8．0的緩沖液，再加入1ml1．5％茚三酮試劑，然后在沸水浴中水浴加熱15min后取出，并冷卻至室溫，用比色管定容至50ml，用754型分光光度計(jì)進(jìn)行光密度測(cè)定(570nm)，同時(shí)做空白。1．3．4DH的計(jì)算DH的計(jì)算是根據(jù)光密度值在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得酪氨酸的濃度，乘以稀釋倍數(shù)
8、，再根據(jù)下式計(jì)算：DH=酶解后多肽液的上清液中的總．NH2。量，苦蕎麥復(fù)合蛋白總．NHz量×100％1．4各種蛋白酶的水解工藝研究以多肽濃度和DH為指標(biāo)，運(yùn)用單因素試驗(yàn)分別選擇木瓜蛋白酶、F1avourzyme復(fù)合風(fēng)味蛋白酶、Neutrase中性蛋白酶、A1calasefoodgrade水解蛋白酶、Protamex復(fù)合酶酶解苦蕎麥復(fù)合蛋白的最佳酶用量、pH、固液比、溫度、酶解時(shí)間。1．5超聲波預(yù)處理對(duì)酶解效果的影響影響高強(qiáng)度超
