缺氧誘導因子1信號通路對缺氧肺動脈平滑細胞增殖和凋亡的影響

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1、南華大學碩士學位論文缺氧誘導因子1信號通路對缺氧肺動脈平滑細胞增殖和凋亡的影響姓名：李熾觀申請學位級別：碩士專業(yè)：內(nèi)科學指導教師：戴愛國20030520李熾觀南華大學碩士學位論文缺氧誘導因子1信號通路對缺氧肺動脈平滑細胞增殖稻凋亡的影晌研究生舉熾觀導拜簸愛國教授中文撼要目的：以缺氧離體培養(yǎng)的大髖悻動膿平滑瓤纓胞(P矗s粥)為磷究對象，研究缺氧對大鼠PASMC增殖和凋亡的影響，同時檢測絲裂原活化蛋白激酶／細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(姒PK／ERK)翡激酶(緞)挪裁裁P098059、一氧化氮會酶(喲辭的镩截劑亞硝基左旋精氨酸(L—NAM

2、E)、腎上腺徽質(zhì)素(ADM)對缺氧火鼠PASMC增殖和凋亡的影響；探討姣氧PASMC之缺氧誘導透子一la(HIF-I8)的蛋囊表達以及P-ERKmiNOS的蛋白表達，同時觀察PD98059，L-NAME，ADM對HI卜la、P-ERK。、iNOS的蛋白表達的影響；以探討缺氧性肺動脈高壓(HPH)中HIF-1豹可能信號通路機割及作用，為HPH的發(fā)瘸機制提供新的理論依據(jù)。方法：i、PASMC綱胞培養(yǎng)：采翊酶消化法培養(yǎng)雄性sD大鼠PASMC，取3q代細胞作為實驗細胞。2、實驗分組：設計常氧組N(20％0。)：低氧組H(1％02+5

3、％c魄+平衡氮)：低氧十ADM組H+A(1％0：+5％C0：+平衡氮，A蹦終濃度為1×lO-'mol／L)，低氧+L-NAME綴H+L(1鏈如+5lj6e饒+平衡氮L-NAME終濃度為】×lO”mol／L)，低氧+PD98059組H+P(1％02+5忱02+平衡氦，PD98059終濃度為5x1011mol／L)。各實驗組設計缺氧24奪辯點俸增殖和凋亡的檢測：設計4小對、8小時、24小辯三個黠闋點作缺飄處理檢測蛋白表達，同時于缺氧8小時點加PD98059、ADM、L-NAME作干擾處理檢測對蛋白表達的影旗。3、掰MTT法濺定緞

4、藏增殖數(shù)鼴情況。4、熙拳定量免疫細胞化學法測定增殖細胞核抗原(FCNA)的表達。5、采用流式細胞儀法檢測細胞凋亡情況。6、WeStenblot蛋白印跡法檢測缺氧誘導HIF—ld、P-ERK。、iNOS的臻壘表達，檢測ADM、L-NAME、PD98059對缺氧誘導HI卜1a、P-ERK。小iNOS的蛋白表達的影響。謄熾觀南華大學碩士學位論文結(jié)果1、采嗣MTT法發(fā)理，姣氧24，l、鼴組豹矗馥明顯褰予常氧組(P0

5、．05)，缺氧+L～N捌8組h蓬驥顯離子缺氧組秘卷氧組(pO，05)。4

6、、westen—blot發(fā)現(xiàn)常氧綴大鼠PASMC見少量HIF-1Ⅱ表達，缺氯4小時后表達增高(PO．05)；A喇對缺氧誘導HI卜lq的袋達有抑制作用(P

7、能抑制缺氧誘導HI卜ln蟹自的表達(PO．05)。ADM促進了缺氧誘導iNO$鬣鑫懿表選(P<0。oi)。L-NAME薅iNOS鬣自戇衷遮沒有影羲。PD98

8、059季牽懿T缺氧誘導iNOS鬣白的表達(P