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1、溫州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文Intermedin對(duì)低氧誘導(dǎo)的大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡和增殖的影響姓名:薛峰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別:碩士專業(yè):病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師:龔永生2012-05-26溫州醫(yī)學(xué)院碩上學(xué)位論文Intermedin對(duì)低氧誘導(dǎo)的大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡和增殖的影響中文摘要目的:1.研究低氧條件下,大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激途徑的關(guān)系。2.研究低氧條件下,新的小分子活性肽intermedin(IMD)對(duì)大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡的影響。3.研究IMD對(duì)低氧誘導(dǎo)的大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響。方法:組織塊貼壁法原代培養(yǎng)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞,用胰蛋白酶
2、消化法傳代細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)用高純度4~6代生長(zhǎng)良好的肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分組:①常氧對(duì)照組:在37。C,21%02,5%C02條件下培養(yǎng)②低氧組:在37。C,1%02,5%C02條件下培養(yǎng)③IMD組:在37。C,1%02,5%C02條件下培養(yǎng)+IMD干預(yù)(用藥濃度lO~、10~、10~mol/L)。Hoechst和Tunel染色計(jì)數(shù)凋亡細(xì)胞檢測(cè)凋亡率;化學(xué)比色法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶含量;分光光度比色法檢測(cè)caspase.3酶活性水平;Westernblot和實(shí)時(shí)定量PCR法分別檢測(cè)caspase.12、GRP78、GRP94蛋白和mRNA表達(dá)水平;Brd
3、u和CCK.8法檢測(cè)細(xì)胞增殖率。用SPSSl2.0軟件統(tǒng)計(jì)分析,所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以i姆表示,p<0.05時(shí)認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果:1.細(xì)胞凋亡率:低氧組明顯高于常氧組(p<0.01);IMD。9組、IMD。8組均高于低氧組(p<0.05);而IMD。7組明顯高于低氧組(p<0.01)。2.caspase.3酶活性:低氧組明顯高于常氧對(duì)照組(矽<0.001);IMD’9組、IMD{組與低氧組相比無(wú)明顯變化(p>O.05);而IMD。7組高于低氧組(p<0.05)。3.GRP94、GRP78及caspase.12蛋白表達(dá)水平:低氧組明顯高于常氧組(p<0.01
4、);而低氧組與IMD母組、IMD喝組、IMD。7組之間蛋白表達(dá)沒(méi)有明顯的變化(p>0.05)。4.caspase.12、caspase一3、GRP78及GRP94基因表達(dá)水平:低氧組明顯高于常氧組(p0.05);而IMD。組caspase.3、GRP78、GRP94基因表達(dá)均高于低氧組(p<0.05)。5.細(xì)胞增殖率:低氧組高于常氧組(p0
5、.05)。6.LDH含量:低氧組顯著高于常氧組(p<0.01),而IMD。組和IMD培組低于低氧組(p<0.05)。結(jié)論:1、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡途徑參與了低氧性肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的凋亡:外源性IMD具有促進(jìn)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凋亡的作用,但內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激凋亡途徑可能不是其促進(jìn)細(xì)胞凋亡的主要途徑。2、外源性IMD具有抑制肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的作用。關(guān)鍵詞:肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞;intermedin;低氧;凋亡;增殖;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激溫州醫(yī)學(xué)院碩仁學(xué)位論文EffectsofIntermedinonApoptosisandProliferationinRatPulmonary
6、ArterySmoothMuscleCellsundertheHypoxicConditionAbstractobjective:1.Toinvestigateeffectofhypoxiaonratpulmonaryarterialsmoothmusclecells(PSMCs)apoptosisanditsendoplasmicreticulumstresspmhway.2.Toinvestigateeffectofthenewsmallmoleculeactivepeptideintermedin(IMD)ontheapoptosisofhypoxi
7、a-inducedPSMCs.3.ToinvestigateeffectoflMDontheproliferationofhypoxia-inducedPSMCs.Methods:Ratpulmonaryarterialsmoothmusclecells(PSMCs)whichwereseparatedfromratpulmonaryarterieswereculturedbytheexplant-attachedmethod.AndtheculturedPSMCswerepassagebytrypsindigestionmethod.The3tO5gen
8、erationsofgoodgrowthofPSMCswerech