小檗堿對肺動脈平滑肌細胞增殖的影響

《小檗堿對肺動脈平滑肌細胞增殖的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。

1、小檗堿對肺動脈平滑肌細胞增殖的影響【摘要】目的：觀察小檗堿對血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)誘導的培養(yǎng)大鼠肺動脈平滑肌細胞(PASMCs)增殖的影響。方法：將組織貼塊法培養(yǎng)的大鼠PASMCs隨機分為對照組，AngⅡ模型組，小檗堿高、中、低劑量組，硝苯地平組和溶劑組。用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法檢測各組PASMCs的生長情況，以流式細胞術檢測細胞周期構成比和增殖指數(shù)(PI)，以乳酸脫氫酶(LDH)法檢測小檗堿對細胞的毒性作用。結果：小檗堿可明顯降低AngⅡ誘導PASMCs的增殖能力，使PASMC3的G0/G1期構成比顯著升高(P<005)，PI顯著下降(P<

2、;005)，且對PASMCs釋放LDH無影響。結論：小檗堿能抑制AngⅡ誘導的PASMCs增殖，且與細胞毒性作用無關。【關鍵詞】血管緊張素Ⅱ肺動脈平滑肌細胞肺動脈高壓小檗堿增殖［Abstract］Objective：Toinvestigatetheeffectofberberineonproliferationofpulmonaryarterysmoothmusclecells(PASMCs)inrats.Methods：PASMCsculturedbytissue_stickingmethodwererandomlydividedintocontrol，mod

3、el，berberine(105～107?mol/L)，nifedipine，andvehiclegroups.Thecellsproliferationabilitiywasdeterminedbymono_nuclearcelldirectcytotoxicityassay.Thecellcyclewas11analyzedbyflowcytometry.Results：Berberinesignificantlyinhi_bitedtheproliferationofPASMCs，andup_regulatedsignificantlytheconstitu

4、entratioofPASMCsG0/G1cellcycle，anddown_regulatedproliferationindex.Conclusion：BerberineantagonizestheproliferationofPASMCsinducedbyangiotensinⅡ.［KeyWords］angiotensinⅡ；pulmonaryarterysmoothmusclecell；pulmonaryhypertension；berberine；proliferation肺動脈高壓的發(fā)病機制尚不十分清楚，目前亦無滿意的治療方法。它的兩大基本病理改變是肺

5、血管收縮和肺血管平滑肌構型重建，因此，抑制肺血管收縮，改善肺循環(huán)血流動力學以及阻止肺血管平滑肌細胞增殖、增強是治療其關鍵［1～3］。鈣拮抗劑(硝苯地平等)是近年來臨床常用的抗肺動脈高壓藥物，與在逆轉(zhuǎn)肺動脈高壓時血管構型重建方面的機制和抑制細胞內(nèi)游離Ca2+濃度的增高有關。小檗堿是一種異喹啉生物堿，能抑制小腸黏膜分泌，擴張血管，抗血小板凝集及改善肺缺血再灌損傷等。它也是一種鈣拮抗劑，能抑制神經(jīng)細胞、心肌細胞、平滑肌細胞等細胞內(nèi)游離Ca2+濃度的增高［1～4］。有報道，平滑肌細胞的增殖與細胞內(nèi)游離Ca2+濃度的增高有關，且平滑肌細胞的異常分化與增殖是血管重構，肺動脈高

6、壓等發(fā)生、發(fā)展的基礎。本實驗旨在研究小檗堿對血管緊張素Ⅱ(AngⅡ11)誘導大鼠肺動脈平滑肌細胞(PASMCs)增殖的影響。1材料與方法11實驗動物SD大鼠［廣州第一軍醫(yī)大學動物中心提供］12只，雌雄不拘，體質(zhì)量200～250?g。12藥品及器材小檗堿，硝苯地平(上海第十七制藥廠，中國。實驗前用DMSO溶解配成)，AngⅡ(Sigma公司，美國)，胎牛血清，M199培養(yǎng)基、胰蛋白酶(Sigma公司，美國)，凱基MTT細胞增殖檢測試劑盒以及細胞周期檢測試劑盒(凱基生物科技發(fā)展有限公司，中國)；乳酸脫氫酶(LDH)檢測試劑盒(南京建成生物工程研究所，中國)；倒置相

7、差顯微鏡(上海光學儀器廠，中國)；超凈工作臺(蘇州凈化設備有限公司，中國)；CO2培養(yǎng)箱(ThermoForma公司，美國)，multiskanspectrum酶標儀(ThermoLabsystem公司，芬蘭)；FACSCalibur流式細胞儀(BectonDickinson公司，美國)。13大鼠PASMCs制備11大鼠PASMCs制備見參考文獻［5，6］，但稍加改進：無菌條件下迅速取出大鼠體內(nèi)肺動脈片段，按組織貼塊法將平滑肌組織塊移入培養(yǎng)瓶，加入M199培養(yǎng)液(含體積分數(shù)20%的胎牛血清)，于37?℃培養(yǎng)箱密閉培養(yǎng)，靜置5?d左右可見細胞從組織塊周圍呈梭形生長

8、出來，換液