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《反義at1r重組腺病毒對人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、反義AT1R重組腺病毒對人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響：許大國,朱潤慶,涂明利 [摘要]目的:研究腺病毒介導(dǎo)反義AT1RcDNA轉(zhuǎn)染對人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞（PASMCs）增殖的影響。方法:構(gòu)建重組反義人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)和表達(dá)β-半乳糖苷酶的對照載體AdCMVLacZ，將培養(yǎng)的PASMCs分為DMEM組、ATⅡ組、AdCMVLacZ+ATⅡ組和AdCMVahAT1+ATⅡ組，分別給予相應(yīng)的干預(yù)因素，用RT-PCR和免疫組化檢測AT1R的表達(dá)，用流式細(xì)胞儀檢測各組PASMCs的增殖指數(shù)。結(jié)果:轉(zhuǎn)染病毒后48hAT1R蛋白表達(dá)在AdCMVahAT
2、1組顯著低于AdCMVLacZ組和DMEM組。給予ATⅡ刺激48h，ATⅡ組PASMCs的增殖指數(shù)（59.69±3.46）高于DMEM組（50.25±1.34，P<0.01），轉(zhuǎn)染AdCMVahAT1后再用ATⅡ刺激48h的AdCMVahAT1+ATⅡ組PASMCs的增殖指數(shù)（24.67±3.19）則顯著低于3個(gè)對照組（P<0.01）,而AdCMVLacZ+ATⅡ組（59.53±3.26）和ATⅡ組比較無顯著性差異。結(jié)論:反義AT1R通過抑制AT1R的表達(dá)而抑制PASMCs增殖?！ 關(guān)鍵詞]反義AT1R；肺動(dòng)脈；平滑肌細(xì)胞；增殖 Abstra
3、ct:ObjectiveToinvestigatetheinfluenceofhumanangiotensinⅡ(ATⅡ)type1receptor(AT1R)antisensecDNA(ahAT1)onproliferationofculturedhumanpulmonaryarterysmoothmusclecells(PASMCs).MethodsTanAT1RmRNA,andAdCMVLacZcontainingLacZ,ologousrebination.ThePASMCsmunohistochemistrymethod.Proliferation
4、index(PI)inedbyfloetry.ResultsAftertransfected48h,AT1RexpressionulatedbyATIIfor48h,ingroupATⅡthePIofPASMCsmarkedlyincreased(P<0.01VsgroupDMEM).Hoarkedlydecreased(P<0.01VsgroupATⅡandgroupDMEM,respectively).ThereanAT1receptorantisensecDNAmaydecreaseproliferationinhumanPASMCsbyi
5、nhibitingAT1Rexpression. Keyonaryartery;Smoothmusclecell;Proliferation 肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)肥大增殖，肌型血管中層增厚，非肌型血管向肌型轉(zhuǎn)化，是肺血管重建、肺動(dòng)脈高壓(PAH)形成的重要環(huán)節(jié)[1]。血管緊張素Ⅱ（ATⅡ）是PASMCs結(jié)構(gòu)和功能異常及肺動(dòng)脈重建的關(guān)鍵因子之一，其作用主要通過其1型受體（AT1R）而實(shí)現(xiàn)[2]。研究表明，F(xiàn)AK[3]、BMP[4]、DCA[5]可以抑制PASMCs增殖，從而逆轉(zhuǎn)PAH的血管重建。然而，重組腺病毒介導(dǎo)反義AT1R對PASMCs的增
6、殖的影響報(bào)道較少，我們對此進(jìn)行了研究，報(bào)道如下?！ ?材料與方法 1.1主要材料、試劑和儀器重組反義人AT1R腺病毒（AdCMVahAT1，滴度8.2×1014pfu/L）和對照腺病毒載體（AdCMVLacZ，滴度9.0×1014pfu/L）。兔抗人AT1R抗體購自SantaCRUZ公司，兔抗人SM-α-actin單抗及免疫組化S-P試劑盒等購自北京中山生物技術(shù)有限公司。PCR擴(kuò)增儀(PERKINELMER5700SequenceDetectertor,美國)，倒置相差顯微鏡（OlympusIX-70，日本），彩色圖像分析儀（Opten,德國），流式細(xì)胞儀
7、（BeckmanEpicsXL,美國）?！ ?.2PASMCs的培養(yǎng)及實(shí)驗(yàn)分組原代培養(yǎng)的人PASMCs取自胸外科肺癌手術(shù)的肺動(dòng)脈3級(jí)分支，采用組織貼壁法培養(yǎng)。經(jīng)形態(tài)學(xué)和特異性兔抗人α-SM-actin免疫組化鑒定，呈特異性“峰、谷”狀生長，所有細(xì)胞胞漿內(nèi)均有被染成棕黃色的絲狀物，證實(shí)為人PASMCs。傳代培養(yǎng)至第4代用于實(shí)驗(yàn)。用分子克隆及細(xì)菌內(nèi)同源重組技術(shù)，構(gòu)建、制備反義人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)[6]。實(shí)驗(yàn)分AdCMVahAT1組、AdCMVLacZ組、DMEM組和ATⅡ組。待細(xì)胞生長至80%融匯時(shí)，前2組按感染復(fù)數(shù)100分別轉(zhuǎn)染AdCMVa
8、hAT1和AdCMVLacZ病毒液，DMEM組加等體
