資源描述:
《反義at1r重組腺病毒對人肺動脈平滑肌細胞增殖的影響》由會員上傳分享,免費在線閱讀,更多相關(guān)內(nèi)容在應(yīng)用文檔-天天文庫。
1、反義AT1R重組腺病毒對人肺動脈平滑肌細胞增殖的影響:許大國,朱潤慶,涂明利 [摘要]目的:研究腺病毒介導(dǎo)反義AT1RcDNA轉(zhuǎn)染對人肺動脈平滑肌細胞(PASMCs)增殖的影響。方法:構(gòu)建重組反義人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)和表達β-半乳糖苷酶的對照載體AdCMVLacZ,將培養(yǎng)的PASMCs分為DMEM組、ATⅡ組、AdCMVLacZ+ATⅡ組和AdCMVahAT1+ATⅡ組,分別給予相應(yīng)的干預(yù)因素,用RT-PCR和免疫組化檢測AT1R的表達,用流式細胞儀檢測各組PASMCs的增殖指數(shù)。結(jié)果:轉(zhuǎn)染病毒后48hAT1R蛋白表達在AdCMVahAT
2、1組顯著低于AdCMVLacZ組和DMEM組。給予ATⅡ刺激48h,ATⅡ組PASMCs的增殖指數(shù)(59.69±3.46)高于DMEM組(50.25±1.34,P<0.01),轉(zhuǎn)染AdCMVahAT1后再用ATⅡ刺激48h的AdCMVahAT1+ATⅡ組PASMCs的增殖指數(shù)(24.67±3.19)則顯著低于3個對照組(P<0.01),而AdCMVLacZ+ATⅡ組(59.53±3.26)和ATⅡ組比較無顯著性差異。結(jié)論:反義AT1R通過抑制AT1R的表達而抑制PASMCs增殖?! 關(guān)鍵詞]反義AT1R;肺動脈;平滑肌細胞;增殖 Abstra
3、ct:ObjectiveToinvestigatetheinfluenceofhumanangiotensinⅡ(ATⅡ)type1receptor(AT1R)antisensecDNA(ahAT1)onproliferationofculturedhumanpulmonaryarterysmoothmusclecells(PASMCs).MethodsTanAT1RmRNA,andAdCMVLacZcontainingLacZ,ologousrebination.ThePASMCsmunohistochemistrymethod.Proliferation
4、index(PI)inedbyfloetry.ResultsAftertransfected48h,AT1RexpressionulatedbyATIIfor48h,ingroupATⅡthePIofPASMCsmarkedlyincreased(P<0.01VsgroupDMEM).Hoarkedlydecreased(P<0.01VsgroupATⅡandgroupDMEM,respectively).ThereanAT1receptorantisensecDNAmaydecreaseproliferationinhumanPASMCsbyi
5、nhibitingAT1Rexpression. Keyonaryartery;Smoothmusclecell;Proliferation 肺動脈平滑肌細胞(PASMCs)肥大增殖,肌型血管中層增厚,非肌型血管向肌型轉(zhuǎn)化,是肺血管重建、肺動脈高壓(PAH)形成的重要環(huán)節(jié)[1]。血管緊張素Ⅱ(ATⅡ)是PASMCs結(jié)構(gòu)和功能異常及肺動脈重建的關(guān)鍵因子之一,其作用主要通過其1型受體(AT1R)而實現(xiàn)[2]。研究表明,F(xiàn)AK[3]、BMP[4]、DCA[5]可以抑制PASMCs增殖,從而逆轉(zhuǎn)PAH的血管重建。然而,重組腺病毒介導(dǎo)反義AT1R對PASMCs的增
6、殖的影響報道較少,我們對此進行了研究,報道如下。 1材料與方法 1.1主要材料、試劑和儀器重組反義人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1,滴度8.2×1014pfu/L)和對照腺病毒載體(AdCMVLacZ,滴度9.0×1014pfu/L)。兔抗人AT1R抗體購自SantaCRUZ公司,兔抗人SM-α-actin單抗及免疫組化S-P試劑盒等購自北京中山生物技術(shù)有限公司。PCR擴增儀(PERKINELMER5700SequenceDetectertor,美國),倒置相差顯微鏡(OlympusIX-70,日本),彩色圖像分析儀(Opten,德國),流式細胞儀
7、(BeckmanEpicsXL,美國)?! ?.2PASMCs的培養(yǎng)及實驗分組原代培養(yǎng)的人PASMCs取自胸外科肺癌手術(shù)的肺動脈3級分支,采用組織貼壁法培養(yǎng)。經(jīng)形態(tài)學(xué)和特異性兔抗人α-SM-actin免疫組化鑒定,呈特異性“峰、谷”狀生長,所有細胞胞漿內(nèi)均有被染成棕黃色的絲狀物,證實為人PASMCs。傳代培養(yǎng)至第4代用于實驗。用分子克隆及細菌內(nèi)同源重組技術(shù),構(gòu)建、制備反義人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)[6]。實驗分AdCMVahAT1組、AdCMVLacZ組、DMEM組和ATⅡ組。待細胞生長至80%融匯時,前2組按感染復(fù)數(shù)100分別轉(zhuǎn)染AdCMVa
8、hAT1和AdCMVLacZ病毒液,DMEM組加等體