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1、艾滋?。℉IV）檢測方法匯總一、艾滋病簡介 艾滋病日的概念來源于1988年，全球衛(wèi)生部大臣關(guān)于艾滋病預(yù)防計(jì)劃的高峰會議上(WorldSummitofMinistersofHealthonProgrammesforAIDSPrevention)提出的。從此，這個概念被全球各國政府、國際組織和慈善機(jī)構(gòu)采納。從此，這個概念被全球各國政府、國際組織和慈善機(jī)構(gòu)采納。 自1981年世界第一例艾滋病病毒感染者發(fā)現(xiàn)至今，短短20多年間，艾滋病在全球肆虐流行，已成為重大的公共衛(wèi)生問題和社會問題，引起世界衛(wèi)生組織及各國政府的高
2、度重視。為號召全世界人民行動起來，團(tuán)結(jié)一致共同對抗艾滋病，1988年1月，世界衛(wèi)生組織在倫敦召開了一個有100多個國家參加的“全球預(yù)防艾滋病”部長級高級會議，會上宣布每年的12月1日為“世界艾滋病日”(WorldAidsDay);1996年1月，聯(lián)合國艾滋病規(guī)劃署(UNAIDS)在日內(nèi)瓦成立;1997年聯(lián)合國艾滋病規(guī)劃署將“世界艾滋病日”更名為“世界艾滋病防治宣傳運(yùn)動”，使艾滋病防治宣傳貫穿全年。二、艾滋病（HIV）檢測方法 (一)抗體檢測 主要有酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)和免疫熒光試驗(yàn)(IFA)。E
3、LISA用去污劑裂解HIV或感染細(xì)胞液提取物作抗原，IFA用感染細(xì)胞涂片作抗原進(jìn)行抗體檢測，如果發(fā)現(xiàn)陽性標(biāo)本應(yīng)重復(fù)一次。為防止假陽性，可做Westernblot(WB，蛋白印跡法)進(jìn)一步確證?！ B法是用聚丙烯酰胺凝膠電泳將HIV蛋白進(jìn)行分離，再經(jīng)傳移電泳將不同蛋白條帶轉(zhuǎn)移于硝酸纖維膜上，加入病人血清孵育后，用抗人球蛋白酶標(biāo)抗體染色，就能測出針對不同結(jié)構(gòu)蛋白抗體，如抗gp120、gp41、P24抗體，特異性較高。 快速檢測法，也稱為金標(biāo)法，也是抗體檢測的一種方法，根據(jù)免疫層析法的原理，用于HIV抗體檢測的
4、定性檢測。 (二)抗原檢測 用ELISA檢測P24抗原,在HIV感染早期尚未出現(xiàn)抗體時,血中就有該抗原存在.由于P24量太少,陽性率通常較低?，F(xiàn)有用解離免疫復(fù)合物法或濃縮P24抗原，來提高敏感性?！ ?三)核酸檢測 用PCR法檢測HIV基因，具有快速、高效、敏感和特異等優(yōu)點(diǎn)，目前該法已被應(yīng)用于HIV感染早期診斷及艾滋病的研究中。 (四)病毒分離 常用方法為共培養(yǎng)法，即用正常人外周血液分離單個核細(xì)胞，加PHA刺激并培養(yǎng)后，加入病人單個核細(xì)胞診斷及艾滋病的研究中。一、艾滋病（HIV）抗體、抗原檢測 H
5、IV抗體一般在人感染后幾周逐漸出現(xiàn),可延續(xù)至終生[15]，血清學(xué)試驗(yàn)分為初篩和確認(rèn)試驗(yàn)。最常用的初篩試驗(yàn)和確認(rèn)試驗(yàn)分別是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和免疫印跡試驗(yàn)(WB)。常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法：酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、免疫印跡試驗(yàn)(WestBlot)、間接免疫熒光法(IFA)?？焖贆z測方法：明膠顆粒凝集試驗(yàn)、斑點(diǎn)免疫結(jié)合試驗(yàn)、P24抗原的檢測、分子生物學(xué)方法、RT?PCR檢測法、熒光實(shí)時PCR檢測技術(shù)、支鏈DNA(bDNA)、連接酶酶促鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(LCR)、核酸序列依賴性擴(kuò)增(NASBA)、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)的擴(kuò)增(TMA) 1、酶聯(lián)免疫吸附試
6、驗(yàn) ELISA法的基本原理是免疫反應(yīng)物通過化學(xué)或免疫學(xué)的方法形成酶結(jié)合物，酶結(jié)合物能與待檢樣品中相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合成為免疫復(fù)合物,然后加入酶底物,經(jīng)酶的催化或水解作用,無色底物產(chǎn)生顏色,用肉眼、分光光度計(jì)觀察結(jié)果。初篩用的HIVELISA試劑目前已經(jīng)發(fā)展到第四代檢測試劑。第一代試劑主要以病毒裂解物或部分純化的病毒抗原包被反應(yīng)板,以檢測血清中的抗體。由于包被的抗原不很純,假陽性率較高。第二代試劑使用基因工程方法得到的重組抗原和合成肽包被反應(yīng)板，由于純化抗原的使用,特異性有了很大提高。第三代試劑使用雙抗原夾心
7、法檢測抗體,進(jìn)一步提高了敏感性。第四代試劑則在第三代的基礎(chǔ)上進(jìn)一步增加了P24抗原的檢測,把HIV抗原和抗P24的抗體同時包被反應(yīng)板,可同時檢測血清中的HIV抗體和P24抗原?！ ?、免疫印跡試驗(yàn) 免疫印跡試驗(yàn)主要用于確認(rèn)試驗(yàn)，基本原理是HIV全病毒抗原經(jīng)過SDS?PAGE電泳,將分子量大小不等的蛋白帶分離開來,然后再把這些已經(jīng)分離的不同蛋白帶電轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上。將此膜切割成條狀,每一條硝酸纖維素膜上均含有經(jīng)電泳分離過的HIV病毒抗原。將待檢血清樣品用稀釋液稀釋成1/100,再把它直接加到硝酸纖維素膜上
8、,恒溫震蕩,使其充分接觸反應(yīng),血清中若含有抗HIV抗體,就會與膜條上的抗原帶相結(jié)合。加入抗人IgG酶結(jié)合物和底物后,即可使有反應(yīng)的抗原?抗體結(jié)合帶呈現(xiàn)紫褐色,根據(jù)出現(xiàn)條帶情況判定結(jié)果。有報告說，免疫印跡試驗(yàn)的特異性不是很好,有大約2%的假陽性率，但免疫印跡試驗(yàn)依然是目前最常用的HIV確認(rèn)試驗(yàn)?！ ?、免疫熒光試驗(yàn)(IFA) 基本原理為應(yīng)用H?9或HUT?78培養(yǎng)細(xì)胞作為載體,用HIV感染細(xì)胞,該細(xì)
