《疫血清學(xué)技術(shù)》PPT課件

《《疫血清學(xué)技術(shù)》PPT課件》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。

1、第十四章免疫血清學(xué)技術(shù)岳華第一節(jié)概述凝聚性反應(yīng)(包括凝集試驗(yàn)和沉淀試驗(yàn))標(biāo)記抗體技術(shù)(包括熒光抗體、酶標(biāo)抗體、放射性標(biāo)記抗體、發(fā)光標(biāo)記抗體技術(shù)等)。有補(bǔ)體參與的反應(yīng)(補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)、免疫粘附血凝試驗(yàn)等)。中和反應(yīng)(病毒中和試驗(yàn)、毒素中和試驗(yàn))等。免疫復(fù)合物散射反應(yīng)(激光散射免疫技術(shù))電免疫反應(yīng)(免疫傳感器技術(shù))免疫轉(zhuǎn)印(WesternBlotting)等新技術(shù)。第二節(jié)凝聚性試驗(yàn)抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合形成復(fù)合物，在有電解質(zhì)存在下，復(fù)合物相互凝聚形成肉眼可見(jiàn)的凝聚小塊或沉淀物，根據(jù)是否產(chǎn)生凝聚現(xiàn)象來(lái)判定相應(yīng)抗體或抗原，稱(chēng)為凝聚性試驗(yàn)。是最簡(jiǎn)單的一類(lèi)血清學(xué)試驗(yàn)。根據(jù)參與反應(yīng)的抗原性質(zhì)不同，分為由顆粒性

2、抗原參與的凝集試驗(yàn)和由可溶性抗原參與的沉淀試驗(yàn)二大類(lèi)。一、凝集試驗(yàn)細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性抗原，或吸附在膠乳、白陶土、離子交換樹(shù)脂和紅細(xì)胞的抗原，與相立抗體結(jié)合，在有適當(dāng)電解質(zhì)存在下，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間，形成肉眼可見(jiàn)的凝集團(tuán)塊，稱(chēng)為凝集試驗(yàn)（agglutinationtest)。參與凝集試驗(yàn)的抗體主要為IgG、lgM,又稱(chēng)為凝集素。凝集試驗(yàn)可用于檢測(cè)抗原或抗體，最突出的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，深受基層工作歡迎。凝集試驗(yàn)可根據(jù)抗原的性質(zhì)、反應(yīng)的方式分為直接凝集試驗(yàn)(簡(jiǎn)稱(chēng)凝集試驗(yàn))和間接凝集試驗(yàn)。顆粒性抗原與凝集素直接結(jié)合并出現(xiàn)凝集現(xiàn)象的試驗(yàn)稱(chēng)作直接凝集試驗(yàn)（directagglutinationtest)。（

3、一）直接凝集試驗(yàn)操作方法玻片法試管法1、玻片法為一種定性試驗(yàn)。將含有已知抗體的診斷血清(適當(dāng)稀釋)與待檢菌懸液各一滴在玻片上混合，數(shù)分鐘后，如出現(xiàn)顆粒狀或絮狀凝集，即為陽(yáng)性反應(yīng)。此法簡(jiǎn)便快速，適用于新分得細(xì)菌的鑒定或分型。如沙門(mén)氏菌的鑒定、血型的鑒定等多采用此法。也可用已知的診斷抗原懸液，檢測(cè)待檢血清中是否存在相應(yīng)抗體，如布氏桿菌的玻板凝集反應(yīng)和雞白痢全血平板凝集試驗(yàn)。2、試管法為一種定量試驗(yàn)，用已知抗原以檢測(cè)待測(cè)血清中是否存在相應(yīng)抗體和測(cè)定該抗體的含量，以協(xié)助臨床診斷或供流行病學(xué)調(diào)查。將待檢血清用生理鹽水作倍比稀釋?zhuān)缓蠹尤氲攘靠乖?，?7℃水浴數(shù)小時(shí)觀(guān)察。視不同凝集程度記錄為十十十十(

4、100%凝集)、十十十(75%凝集)、十十(50%凝集)、十（25%凝集)和-(不凝集)。以其“十十”以上的血清最大稀釋度為該血清的凝集價(jià)(或稱(chēng)滴度)。（二）間接凝集試驗(yàn)將可溶性抗原(或抗體)先吸附于一種與免疫無(wú)關(guān)的、一定大小的不溶性顆粒(統(tǒng)稱(chēng)為載體顆粒)的表面，然后與相應(yīng)抗體(或抗原)作用，在有電解質(zhì)存在的適宜條件下，所出現(xiàn)的特異性凝集反應(yīng)稱(chēng)為間接凝集反應(yīng)。間接凝集反應(yīng)由于載體顆粒增大了可溶性抗原的反應(yīng)面積，因此當(dāng)顆粒上的抗原與微量抗體結(jié)合后，就足以出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集反應(yīng)。間接凝集反應(yīng)的優(yōu)點(diǎn)是敏感性高，它一般要比直接凝集反應(yīng)敏感2～8倍。但特異性較差。常用的載體有紅細(xì)胞(“O”型人紅細(xì)胞

5、，羊紅細(xì)胞)、聚苯乙烯膠乳顆粒，其次為白陶土、離子交換樹(shù)脂、火棉膠等。抗原多為可溶性蛋白質(zhì)如細(xì)菌、立克次體及病毒的可溶性抗原、或原蟲(chóng)、吸蟲(chóng)、絲蟲(chóng)的浸出液、或動(dòng)物的可溶性物質(zhì)、或激素及各種組織器官浸出液、域植物性蛋白質(zhì)如花粉浸出液等;某些細(xì)菌的可溶性多糖也可吸附于載體上。當(dāng)載體吸附了可溶性抗原后即稱(chēng)為致敏顆粒。亦稱(chēng)被動(dòng)血凝試驗(yàn)(PHA)，是將可溶性抗原致敏于紅細(xì)胞表面，用以檢測(cè)相應(yīng)抗體，在與相應(yīng)抗體反應(yīng)時(shí)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)凝集。1、間接血凝試驗(yàn)(IHAT)2、反向間接血凝試驗(yàn)：如將抗體致敏于紅細(xì)胞表面，用以檢測(cè)檢樣中相應(yīng)抗原，致敏紅細(xì)胞在與相應(yīng)抗原反應(yīng)時(shí)發(fā)生凝集，稱(chēng)為反向間接血凝試驗(yàn)(revers

6、epassiveheamagglutinationassay，RPHA)。3、協(xié)同凝集試驗(yàn)(co-agglutinationtest，COAG)葡萄球菌A蛋白(StaphylococalProteinA,SPA)是金黃色葡萄球菌的特異性表面抗原，能與多種哺乳動(dòng)物lgG分子的Fc片結(jié)合。SPA與lgG結(jié)合后，后者的Fab片暴露于外，并保持其抗體活性，當(dāng)此SPA-特異性抗體與相應(yīng)的抗原結(jié)合時(shí)，就可產(chǎn)生凝集反應(yīng)。本法廣泛應(yīng)用于多種細(xì)菌和某些病毒的快速診斷。（三）、間接凝集抑制試驗(yàn)二、沉淀試驗(yàn)可溶性抗原(如細(xì)菌的外毒素、內(nèi)毒素、菌體裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、組織浸出液等)與相應(yīng)抗體結(jié)合，在適

7、量電解質(zhì)存在下，形成肉眼可見(jiàn)的白色沉淀，稱(chēng)為沉淀試驗(yàn)(precipitationtest)。參與沉淀試驗(yàn)的抗原稱(chēng)沉淀原，抗體稱(chēng)為沉淀素。（一）環(huán)狀沉淀試驗(yàn)是最簡(jiǎn)單、最古老的一種沉淀試驗(yàn)，目前仍有應(yīng)用。在小口徑試管內(nèi)先加入已知抗血清，然后小心沿管壁加入待檢抗原于血清表面，使之成為分界清晰的兩層。數(shù)分鐘后，兩層液面交界處出現(xiàn)白色環(huán)狀沉淀，即為陽(yáng)性反應(yīng)。本法主要用于抗原的定性試驗(yàn)，如診斷炭疽的Ascoli試驗(yàn)、鏈球菌血清型鑒定