環(huán)氧合酶2選擇性抑制劑對(duì)膽管癌細(xì)胞增殖的抑制作用

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1、華中科技大學(xué)博士學(xué)位論文環(huán)氧合酶-2選擇性抑制劑對(duì)膽管癌細(xì)胞增殖的抑制作用姓名：吳高松申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：外科學(xué)、普外指導(dǎo)教師：鄒聲泉2003.4.1華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文·摘要環(huán)氧合酶一2選擇性抑制劑對(duì)膽管癌細(xì)胞增殖的抑制作用中文摘要，f環(huán)氧合酶是花生四烯酸代謝的關(guān)鍵限速酶，有兩種基因型。結(jié)構(gòu)型基因環(huán)氧《合酶1為“看家基因”，在人體中的表達(dá)保持相對(duì)穩(wěn)定：誘導(dǎo)型基因環(huán)氧合酶一2是非甾體類抗炎藥的靶基因，可被缺氧、損傷、炎癥等多種因素誘導(dǎo)產(chǎn)生，引起炎癥部位前列腺素含量增加，促進(jìn)炎癥反應(yīng)和組織損傷。近年來(lái)研究表明，環(huán)氧合酶一2不僅是炎癥反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)，而且在很多腫瘤組織中表達(dá)上調(diào)，

2、與腫瘤的發(fā)生與發(fā)展有關(guān)。流行病學(xué)研究也發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)期服用環(huán)氧合酶抑制劑——阿斯匹林或其它非甾體類抗炎藥的人群胃、腸癌及肺癌發(fā)生率降低。環(huán)氧合酶一2選擇性抑制劑因其安全性和有效性正被試圖用作某些腫瘤的化學(xué)預(yù)防和輔助治療藥物，環(huán)氧合酶一2選擇性抑制劑Celecoxib在鼠多種腫瘤模型中有預(yù)防腫瘤發(fā)生作用。Celecoxib(Celebrex“)已通過(guò)美國(guó)食品與藥品管理局批準(zhǔn)上市，成為市場(chǎng)上第一個(gè)環(huán)氧合酶一2選擇性抑制劑，用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，最近又通過(guò)批準(zhǔn)用于治療癌前期疾病——家族性結(jié)腸息肉病，這給腫瘤的化學(xué)預(yù)防帶來(lái)了希望。膽管癌發(fā)病率在全球都有遞增趨勢(shì)，目前還沒(méi)有理想的治療方法，尋找一種安全、有效

3、的藥物用于膽管癌高危人群的化學(xué)預(yù)防從而防止膽管癌的發(fā)生極為重要。膽管癌發(fā)病的高危因素有膽管結(jié)石、原發(fā)性硬化性膽管炎、先天性膽管擴(kuò)張癥(特別是行囊腫腸管吻合術(shù)后)以及中華支睪吸蟲(chóng)感染、慢性炎性腸病等。我們發(fā)現(xiàn)，在這些因素中有一個(gè)共同的環(huán)節(jié)：即慢性損傷和慢性炎癥。因?yàn)榄h(huán)氧合酶一2是炎癥反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)又參與多種人類腫瘤的發(fā)生與發(fā)展，因此我們提出一個(gè)假說(shuō)：膽管癌的發(fā)生與發(fā)展通過(guò)環(huán)氧合酶一2途徑，抑制環(huán)氧合酶一2基因的表達(dá)可以預(yù)防和治療膽管癌。為證實(shí)這一假說(shuō)，我們分以下四個(gè)部分作了～些研究。等芻卜華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文一摘要第一部分環(huán)氧合酶一2基因及環(huán)氧合酶一2蛋白在膽管癌中的表達(dá)，，目的1

4、．研究環(huán)氧合酶～1及環(huán)氧合酶～宣強(qiáng)白在膽管癌組織、癌旁膽管組織及正常膽管組織中的表達(dá)，探討環(huán)氧合酶基因與膽管癌發(fā)生與發(fā)展的關(guān)系。2．檢測(cè)環(huán)氧合酶～2基因與環(huán)氧合酶一2蛋白在人膽管癌細(xì)胞和人正常膽管細(xì)胞中的表達(dá)。材料與方法1．應(yīng)用免疫組織化學(xué)sABc法檢測(cè)56例膽管癌組織、31例癌旁膽管組織和6例正常膽管組織中環(huán)氧合酶一l和環(huán)氧合酶一2蛋白的表達(dá)情況，并結(jié)合臨床病理指標(biāo)進(jìn)行分析。2．應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)SABC法檢測(cè)兩株人膽管癌細(xì)胞(QBc一939和SK-Cha一1)、16例原代培養(yǎng)人膽管癌細(xì)胞和6例原代培養(yǎng)人正常膽管細(xì)胞中環(huán)氧合酶一2蛋白的表達(dá)情況。3．應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢測(cè)兩株人膽管癌

5、細(xì)胞(QBC一939和sK-cha_1)、16例原代培養(yǎng)人膽管癌細(xì)胞和6例原代培養(yǎng)人正常膽管細(xì)胞中環(huán)氧合酶一2mRNA的表達(dá)情況。4．應(yīng)用蛋白印跡法檢測(cè)兩株人膽管癌細(xì)胞(QBC-939和sK-cha_1)、16例原代培養(yǎng)人膽管癌細(xì)胞和6例原代培養(yǎng)人正常膽管細(xì)胞中環(huán)氧合酶一2蛋白表達(dá)水平。結(jié)果1．環(huán)氧合酶一l在膽管癌組織、癌旁膽管組織及正常膽管組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為96％(54／56)、94％(29／31)和100％(6／6)，三者兩兩比較差異均無(wú)顯著性(P>O．05)，膽管癌組織中環(huán)氧合酶一1的表達(dá)在臨床病理指標(biāo)間的差異均無(wú)顯著性(P>0．05)。2．環(huán)氧合酶一2在膽管癌組織、癌旁膽管組織及

6、正常膽管組織中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為86％(48／56)、3996(12／31)和O％(0／6)，三者之間的差異均有極顯著性意義(P<0，01)。華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文·摘要3．膽管癌組織中環(huán)氧合酶一2表達(dá)陽(yáng)性率在不同腫瘤分化程度及是否有淋巴結(jié)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移中的差異有顯著性(尸

7、為陰性。5．逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)檢測(cè)QBC一939細(xì)胞和SK—Cha-1細(xì)胞中環(huán)氧合酶一2mRNA表達(dá)均為陽(yáng)性；16例原代培養(yǎng)人膽管癌細(xì)胞中14例(88％)陽(yáng)性，2例陰性：6例原代培養(yǎng)人正常膽管細(xì)胞中環(huán)氧合酶-2mRNA均為陰性。6．蛋白印跡法檢測(cè)QBC-939細(xì)胞和SK-Cba-I細(xì)胞中環(huán)氧合酶一2蛋白表達(dá)均為陽(yáng)性；16例原代培養(yǎng)人膽管癌細(xì)胞中14例(88％)陽(yáng)性，2例陰性；6例原代培養(yǎng)人正