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《抗原沖擊樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)CTL特異性抗白血病作用的體外研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、摘要目的：研究白血病患者骨髓來源的單個核細(xì)胞體外誘導(dǎo)為樹突狀細(xì)胞的有效方法；觀察不同途徑來源的白血病抗原沖擊樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞特異性的抗白血病效應(yīng)，為急性髓性白血病免疫治療提供理論依據(jù)。方法：lo例急性髓性白血病患者骨髓經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離單個核細(xì)胞，予重組人粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM．CSF)、鈣離子載體A23187聯(lián)合培養(yǎng)6天誘導(dǎo)分化為樹突狀細(xì)胞；分別用弱酸洗脫法提取單個核細(xì)胞MHC。I類抗原肽以及用0．4％KClf氐滲法提取的白血病抗原，沖擊樹突狀細(xì)胞，形成負(fù)載抗原的AML．DC；抗原與樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng)6天后與正常
2、人外周血分離的、經(jīng)IL．2培養(yǎng)的T細(xì)胞共同培養(yǎng)，生成特異的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞；采用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法)比較不同方法產(chǎn)生的CTL細(xì)胞對急性髓性白血病細(xì)胞的殺傷活性。用倒置顯微鏡觀察AML．DC誘導(dǎo)前后形態(tài)學(xué)變化，用流式細(xì)胞儀檢測急性髓性白血病細(xì)胞誘導(dǎo)前后CDl”CD83表型變化以及刺激T細(xì)胞后其CDl52的表達(dá)。結(jié)果：白血病患者骨髓來源的單個核細(xì)胞經(jīng)過100ng／mlGM．CSF、500ng／ml鈣離子載體A23187成功誘導(dǎo)為樹突狀細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察具有典型的樹突狀細(xì)胞形態(tài)；其CDl伐、CD83表達(dá)誘導(dǎo)前分別為1．164
3、-0．15％、7．28+0．21％，CD83誘導(dǎo)后48h最高，達(dá)59．69+2．56％，較誘導(dǎo)前差別有統(tǒng)計學(xué)意義，以后逐漸降低，CDla則在96h達(dá)最高，較誘導(dǎo)前明顯升高，有統(tǒng)計學(xué)意義；弱酸洗脫法獲得的抗原肽沖擊樹突狀細(xì)胞致敏T細(xì)胞后殺傷白血病細(xì)胞的能力最高，為76．654-12．62％，未負(fù)載抗原的樹突狀細(xì)胞致敏T細(xì)胞后殺傷白血病細(xì)胞的能力為29．634-5．49％，兩者存在顯著性差異(P<0。01)，空白對照組最低，為10．274-2．84％。結(jié)論：急性髓性白血病患者來源的骨髓單個核細(xì)胞經(jīng)GM—CSF、鈣離子載體A23187能夠成功
4、誘導(dǎo)為樹突狀細(xì)胞；弱酸洗脫法獲得的抗原肽沖擊樹突狀細(xì)胞致敏T細(xì)胞能夠獲得更強(qiáng)的殺傷白血病細(xì)胞的能力。關(guān)鍵詞：白血?。粯渫粻罴?xì)胞；細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞；鈣離子載體IIAbstractABSTRACTObjective：Toexploretheeffectivemethodforcultureofthedendriticcellsfrombonemarrowmononuclearcellofacutemyelocyticleukemiapatientandthespecificanti-leukemiccelleffectmediatedby
5、dendriticcellspulsedwithacutemyelogenousleukemiaantigeninvitroandtoprovideatheoreticbasisofAMLimmunotherapy．Method：Bonemarrowmononuclearcellsisolatedwithlymphocytesseparationmediumfrom10casesofAMLpatientswereculturedwithrecombinategranulocyte-macrophagecolonystimulatingf
6、actorandcalciumionophoreA23187for6-daytoinducetodendriticcells．InduceddendriticcellswerepulsedwithmajorhistocompatibilitycomplexclassIpeptidesisolatedbyacidelutionassayandacutemyelogenousleukemiaantigenisolatedbydestroyassaywithO．4％KCl．respectively．AftertheAML-DChadbeenp
7、ulsedbytheAMLantigenfor6-day,theywerecoculturedwithTlymphocytederivedfromhealthyperipheralbloodwhichhadbeenculturedwithIL一2for7daystoproducingcytotoxicTlymphocyte．Then，thedifferencesoftheinhibitionratioofCTLproducingwithdifferentmethodtoAMLcellswerecomparedbymethylthiazo
8、lyltetrazolium(MTT)assay,themorphologychangesofAML-DCwereobservedwithinvertedmicroscope，thephenotypecha
