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1、碩士學位論文天然植物功能因子對尿酸代謝酶調(diào)控作用機制研究作者姓名史傳超學科專業(yè)食品科學與工程指導教師任嬌艷教授所在學院食品科學與工程學院論文提交日期2018年6月StudyonregulationmechanismofnaturalsubstancesonuratemetabolismenzymesADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：ShiChuanchaoSupervisor：Prof.RenJiaoyanSouthChinaUniversityofTechn
2、ologyGuangzhou,China分類號：TS201學校代號：10561學號：201520120661華南理工大學碩士學位論文天然植物功能因子對尿酸代謝酶調(diào)控作用機制研究國家自然科學基金面上項目（31671804）廣東省協(xié)同創(chuàng)新與平臺環(huán)境建設項目（2017B090901063）廣州市產(chǎn)學研協(xié)同創(chuàng)新重大專項（201604020047）作者姓名：史傳超指導教師姓名、職稱：任嬌艷教授申請學位級別：工學碩士學科專業(yè)名稱：食品科學與工程研究方向：食品營養(yǎng)與健康論文提交日期：2018年6月1日論文答辯日期：2018年6月4日學位授予單
3、位：華南理工大學學位授予日期：年月日答辯委員會成員：主席：鄭建仙教授委員：任瑞文研究員；楊寶研究員；孫世利副研究員；任嬌艷教授摘要本文以藥食同源植物葛根、蒲公英，可用于保健食品的中草藥大薊，可食用植物洋薊、芹菜籽，以及苗藥黑骨藤為原料，采用水提、醇提兩種工藝進行天然成分提取，檢測提取物的組成成分、抗氧化活性、體外黃嘌呤氧化酶（XO）抑制活性，并構建高尿酸細胞模型應用于所得產(chǎn)物降尿酸活性檢測。以尿酸代謝酶為靶點，采用分子對接技術模擬評價小分子化合物的生物活性，計算小分子的分子描述符，以分子描述符為自變量，酶結合活性為因變量構建構效
4、關系模型，可廣泛用于降尿酸功能因子高效、快速地預測篩選。采用沸水浸提、乙醇浸提兩種不同方式對六種天然植物原料進行功能成分提取，檢測12種提取物中黃酮類、多酚類、多糖類、蛋白質(zhì)類等活性成分的含量，發(fā)現(xiàn)活性成分含量與植物原料種類、提取工藝等參數(shù)密切相關。采用DPPH?清除率檢測提取物的抗氧化活性，優(yōu)化酶標儀法測定DPPH?清除率實驗條件為：吸收波長517nm、DPPH?濃度0.2mg/mL、溫度37°C、反應時間20min，測得蒲公英水提物、醇提物均有較好的DPPH?清除活性，IC50分別為0.45mg/mL和0.46mg/mL。測
5、定提取物氧化自由基吸收能力（ORAC），葛根提取物具有最佳ORAC活性，葛根醇提物Trolox當量為55.06?mol/L，葛根水提物以31.69?mol/L次之。采用雙酶偶聯(lián)法測定植物功能成分的XO抑制活性，葛根醇提物的XO抑制活性顯著高于其他提取物，IC50為6.14mg/mL。分析抗氧化活性與XO抑制活性相關性，發(fā)現(xiàn)DPPH?清除活性與XO抑制活性無線性相關性，而ORAC活性與XO抑制活性顯著相關，Pearson系數(shù)為0.697。采用人腎小管上皮細胞（HK-2cells）為造模細胞，腺苷為造模物質(zhì)，構建高尿酸細胞模型。以高
6、尿酸細胞模型檢測12種提取物降尿酸活性，結果顯示芹菜籽水提物、葛根醇提物與黑骨藤水提物表現(xiàn)出明顯的降尿酸活性且具有劑量效應，芹菜籽水提物濃度4.0mg/mL時尿酸產(chǎn)量為模型對照組的65.70%；葛根醇提物濃度0.5mg/mL時尿酸產(chǎn)量為模型對照組的60.28%，濃度2.0mg/mL時尿酸產(chǎn)量僅為模型對照組的13.14%；黑骨藤水提物濃度0.125mg/mL時尿酸產(chǎn)量為模型對照組的49.05%。采用分子對接軟件AutoDockVina將來源于芹菜籽、葛根、蒲公英、洋薊、大薊和黑骨藤的311個小分子化合物分別與腺嘌呤核苷脫氨酶（AD
7、A）、嘌呤核苷磷酸化酶（PNP）、黃嘌呤氧化酶（XO）進行模擬對接，篩選出結合活性高于三種酶所對應陽性I抑制劑的小分子抑制劑分別有112、46、74個。其中補骨脂異黃酮對XO和PNP均有最佳結合活性，芹菜素-7-O-咖啡?；咸烟擒諏DA具有最佳結合活性。ADA、XO和PNP三種酶的抑制劑均以黃酮及其苷元類為主，分別占總數(shù)的68.48%、80.00%和83.05%。其中，ADA抑制劑26.13%來源于葛根，22.52%來源于蒲公英，18.02%來源于芹菜籽；PNP抑制劑25.58%來源于芹菜籽，蒲公英與葛根所含組分數(shù)同為20.
8、93%；XO抑制劑36.11%來源于葛根，蒲公英與大薊所含組分數(shù)同為16.67%。分子對接結果顯示葛根中的小分子對ADA、PNP、XO三種酶均有較好的抑制作用，這與雙酶偶聯(lián)法、高尿酸細胞模型法測得結果一致。采用AutoDock4.2分析分子相互作用，發(fā)現(xiàn)ADA與
