核醫(yī)學(xué) 其它體外分析 分子核進(jìn)展

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1、其它體外放射分析含意：除RIA之外的一切體外放射分析，但它的應(yīng)用有一定局限性。一、競(jìng)爭(zhēng)蛋白結(jié)合分析（CPBA）：待分析物的結(jié)合劑：蛋白質(zhì)舉例：TBG甲狀腺素結(jié)合球蛋白→甲狀腺素CBG皮質(zhì)醇結(jié)合球pro→皮質(zhì)醇SHBG性激素結(jié)合球pro→皮質(zhì)醇內(nèi)因子結(jié)合蛋白→B12視蛋白→視黃醛蛋白激酶→CAMP、cGMP牛乳蛋白酶、葉酸還原酶→葉酸方法：競(jìng)爭(zhēng)性與RIA相同優(yōu)點(diǎn)：這些蛋白天然存在，來(lái)源豐富，制備簡(jiǎn)單，省時(shí)，方法學(xué)成熟易建立。缺點(diǎn)：①比抗體的特異性差、靈敏度也差，為了提高特異性，須在樣品制備上下功夫。如純化，清除干擾物等，不夠方便。②該類蛋白種類有限，應(yīng)用范圍受限

2、，已有很多被RIA和IRMA取代。二、放射受體分析RRARRA與RBA的區(qū)別含義：以受體為結(jié)合劑，利用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合原理對(duì)配體進(jìn)行體外分析。受體的分類：膜R：一般為水溶性配體（肽類激素、兒茶酚胺等）胞內(nèi)R：（漿or核），一般為脂溶性的配體（甲狀腺素，類固醇）受體樣品的制備：與RBA相同。標(biāo)記品的要求：要求配體標(biāo)記前后生物活性不受影響。因?yàn)闃?biāo)記配體在RRA時(shí)活性往往是降低的。如125I標(biāo)上一個(gè)不影響，如果有二個(gè)125I標(biāo)上就有變化了。RRA的優(yōu)點(diǎn)：1、R與L的結(jié)合反應(yīng)快、瞬間完成、比RIA出結(jié)果快。2、能反應(yīng)L的生物學(xué)活性。如冬眠靈有多種衍生物，它們均能與特異抗體結(jié)合

3、，但只有有生物活性的衍生物才能與受體結(jié)合，這種測(cè)定反應(yīng)L的生物學(xué)活性，而不是免疫活性。所以研究物質(zhì)結(jié)合與功能RRA占有相當(dāng)?shù)牡匚?。RRA的缺點(diǎn)：1、靈敏度比RIA小10—100倍，這是因?yàn)椴煌M織間得來(lái)的受體對(duì)配體的親和力有差異，又難以尋找高親和力的受體。2、反應(yīng)條件和環(huán)境嚴(yán)格，離子強(qiáng)度，溫度、PH值要求高。3、NSB結(jié)合容量大，親和力又小，NSB較大臨床應(yīng)用：1、利用受體來(lái)測(cè)體內(nèi)配體的含量。2、測(cè)定體內(nèi)抗受體抗體的量。有些疾病發(fā)現(xiàn)體內(nèi)存在著抗R的抗體（自身抗體），如Gtrave’sdisease(TSH、甲狀腺素R的抗體)；InsulinB型抗癥（InsR-

4、Ab）、重癥肌無(wú)力（乙酰膽鹼受體抗體）。這類受體的抗體有兩類特征：1、受體結(jié)合部位抗體（R—Ab）：當(dāng)R與Ab成復(fù)合物時(shí)，復(fù)合物中的R可再與配體結(jié)合，即R的結(jié)合位點(diǎn)保留，但復(fù)合物卻抑制配體與單獨(dú)存在的游離R相結(jié)合。2、受體非結(jié)合部位抗體（Ab）：它的特征是復(fù)合物對(duì)配體與R的結(jié)合無(wú)抑制作用。三、酶的放射分析（REA）1、酶的活性（力）分析概念：酶活性（力）：指酶催化加速反應(yīng)的能力。表示法：濃度/時(shí)間（反應(yīng)酶促反應(yīng)速度的快慢）酶的反應(yīng)速度，可以是底物的消耗量或產(chǎn)物的生成量單位：Kat：（催量）指在規(guī)定條件下，每秒鐘酶催化1mol底物轉(zhuǎn)變所需要酶的量。舊單位：U；1

5、U=16.67kat符號(hào)：底物用S表示，S*指標(biāo)記的底物酶用E表示P產(chǎn)物反應(yīng)式：*S+EE*SE*P*P+E經(jīng)過(guò)一般時(shí)間，從反應(yīng)液中分離出*P，測(cè)放。*P的CPS酶活性（力）的計(jì)算（kat）=---------------------SA·t·e*P的CPS酶的比活力（kat/g）=---------------------SA·t·e·w可知以下幾個(gè)量：t（分）：*P的放射性CPS；SA標(biāo)記物的比活度；e儀器效率；W參加反應(yīng)的酶的蛋白量（mg）。優(yōu)點(diǎn):1、靈敏度高（放射性標(biāo)記品）2、特性性強(qiáng)，由酶的專一性決定。3、適用廣，絕大多數(shù)酶可用此法。缺點(diǎn):1、需高質(zhì)

6、量的定位標(biāo)記物2、分離方法復(fù)雜，難以自動(dòng)化。酶液制備：標(biāo)記物制備與選擇PH、激活或抑制劑的使用、溫度、時(shí)間等（自學(xué)）2、酶促同位素衍生物分析：實(shí)際上分析底物含量。反應(yīng)：標(biāo)記試劑+待測(cè)底物標(biāo)記衍生物E舉例：32P—rATP+膽鹼[32P]一磷酰膽鹼+ADP激酶膽鹼衍生物的放射性強(qiáng)弱標(biāo)記試劑比活度可計(jì)算待測(cè)物量（底物）注意：需要知道一個(gè)分子待測(cè)物能與標(biāo)記試劑結(jié)合的分子比。如果用雙同位素標(biāo)記可以更準(zhǔn)確。3、酶的激動(dòng)劑和抑制劑測(cè)定法：原理：激動(dòng)或抑制劑可加快或減慢酶促反應(yīng)的速率，用系列濃度的激動(dòng)或抑制劑與酶進(jìn)行定時(shí)反應(yīng)，分離產(chǎn)物測(cè)放射性，可計(jì)算出激動(dòng)劑或抑制劑的量。如

7、磷酸吡哆醛能使酪氨酸脫羧基產(chǎn)生Co2，14C標(biāo)記酪氨酸經(jīng)磷酸吡哆醛作用產(chǎn)生14Co2，可計(jì)算磷酸吡哆醛的量。4、放射酶促飽和分析法：與酶的底物分析相同該法類同RIA的競(jìng)爭(zhēng)，不同之處是E不斷從E*S和ES中釋放出來(lái)而再去與S反應(yīng)，如果反應(yīng)時(shí)間足夠長(zhǎng)，因*S與S為同一物，會(huì)均被轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物，失去競(jìng)爭(zhēng)之間的函數(shù)關(guān)系，所以不能象RIA那樣等待反應(yīng)平衡，而應(yīng)該在一定時(shí)間就得分離測(cè)定。這是它的關(guān)鍵（特點(diǎn)之一）5，ELISA：固相酶標(biāo)記-免疫分析待測(cè)抗原固相化，然后與酶標(biāo)記的抗體結(jié)合形成復(fù)合物，最后不測(cè)放射性而是讓酶顯色計(jì)算物質(zhì)含量。6、整體酶活力測(cè)定及應(yīng)用二氧化碳呼氣試驗(yàn)：

8、用14C或13C等標(biāo)記酶的底物，如經(jīng)過(guò)