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《【精品】核醫(yī)學體外分析教案-北大》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在工程資料-天天文庫。
1、第一節(jié)放射免疫分析一、原理(一)基本原理放射免疫分析(RIA)的基礎是放射性核素標記的抗原(radionuclidelabeledantigen)和非標記抗原(unlabeledantigen)(標準抗原或被測抗原)同時與限量的特異性抗體(specificantibody)進行競爭性免疫結(jié)合反應(competitiveimmunebindingreaction),其競爭關系可用下式表示:Ag+Ab<*^Ag-Ab+AgI*AgAV*Ag+*Ag-Ab式中：*Ag為標記抗原，Ag為非標記抗原，Ab
2、為特異性抗體，*Ag-Ab為標記抗原抗體復合物，Ag-Ab為非標記抗原抗體復合物。由于*Ag與Ag的免疫活性完全相同，對Ab具有同樣的親和力，當*人盤和Ab為恒定量，Ag和*人8的總量大于Ab上的有效結(jié)合點時，*Ag-Ab的形成是隨著Ag量的增加而減少，剩下來的未結(jié)合或游離的*Ag則隨著Ag量的增加而增加，稱為競爭結(jié)合反應（competitivebindingreaction）,因此測定*Ag-Ab或*人盤即nJ??????????+?ooooOOOOoooooooooooooooo2S■■■■
3、推出被測的Ag量（圖13-1）o圖13-1放射免疫分析原理示意圖（二）標準曲線配制一系列已知濃度的標準抗原，分別向其中加入固定量的標記抗原和抗體，反應平衡后，分離抗原的結(jié)合部分和游離部分，測定*Ag-Ab的放射性B或游離*Ag的放射性F,計算岀結(jié)合率13%[13/（B+F）X100%]或其他指標，如B/Bo%（B°表示不含非標記抗原管的最大結(jié)合放射性）。以B%或B/弘%為縱座標，標準抗原的濃度為橫座標，繪制曲線即為標準曲線（standardcurve）（圖13-2）o依同法測得被測樣品的B%或B
4、/Bo%,即可從此標準曲線上杳出樣品中被測抗原的濃度。50XW02550100200400866^025501002（!）04008^6aAi啟度匕“區(qū)度標準曲線a.以B/Bt%為縱康標的標庭曲蛾b.以為縱冷懷的休廈曲紋e圖13-2標準曲線二、基本條件_(-)特異性抗體1.抗體親和力抗體親和力(antibodyaffinity)是抗體與抗原之間相互作用的一種結(jié)合能力或強度。親和力大即免疫結(jié)合既快又牢固，不易重新解離。kiAg+Ab<>Ag-Ab1<2親和力的人小用親和常數(shù)(affinitycon
5、stant)Ka值來表示，心=ki/k2,一般更求?值在10lo-1012L/M之間。親和常數(shù)憶的計算最常用的方法是標準作圖法：即以B/F為縱坐標，以[B]為橫坐標，得到一條直線，其斜率的負數(shù)即為K“(圖13-3)o圖13-3標準分析圖親和常數(shù)K“還可利用常規(guī)RIA中的兒個參數(shù)進行計算:6XBo%Ka=(1-Bo%)(2—B。％)(4-Bo%)(3ED50-ED^)式中Bo%為零標準管的結(jié)合率，ED和和E%分別為結(jié)合率為50%和25%時對應劑量，可由標準曲線上杏得。1.抗體特異性指抗體分別與相應
6、抗原和抗原結(jié)構(gòu)類似物的結(jié)合能力的比較?？贵w與相應抗原結(jié)合能力強，而與該抗原結(jié)構(gòu)類似物結(jié)合能力弱，則特界性高?？贵w與抗原結(jié)構(gòu)類似物的結(jié)合稱交叉反應(crossreaction)。501002004008001600同類物(ng/al)交叉反應試臉交叉反應率二EDso(B)/EDso(A)X100%(圖13-4)o圖13-4交叉反應試驗2.抗血清滴度以免疫反應屮所需抗血清(antiserum)的稀釋度的倒數(shù)來表示，稀釋倍數(shù)越高，滴度(titer)越高，表示抗體的效價越高。在實際工作中要找出抗血清的最
7、適稀釋度，即與抗原比例最適當、檢測抗原特異性最高、標準曲線斜率最大的稀釋度(圖13-5)。100圖13-5抗血清滴度曲線測定方法：將抗血淸稀釋成不同濃度，分別加入恒量標記抗原，經(jīng)溫育后分離B、F,求出不同稀釋度的B%,以稀釋度為橫座標，B%為縱座標，繪制出抗血清滴度Illi線(antiserumtitercurve),一般以B%為30%?50%的抗體稀釋度為最適稀釋度。(―)標記抗原對標記抗原的要求：1.比活度(specificactivity):比活度越高，靈敏度越高。2.放射化學純度(rad
8、iochemicalpurity):指具有免疫活性的標記抗原的放射性占總放射性的百分率?一般要求大于95%o3.免疫活性：蛋白質(zhì)分子上標記過多的碘原子就可能引起免疫活性的改變，一般以每個蛋白質(zhì)分子上只標1?2個1251原子為宜。4.穩(wěn)定性。(三)標準品_1.對標準品的要求1.標準品(standard)與被測物應屬同一種物質(zhì)2.在與抗體發(fā)生反應時，應與被測物具有相等的活性和親和力3.高度純化4.定量精確1.標準品的級別國家標準：是高度純化的標準品，并與各國的標準及世界衛(wèi)生組織(WHO)的標準進行過
