最新[臨床醫(yī)學]體外分析技術 核醫(yī)學-藥學醫(yī)學精品資料.ppt

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1、進入夏天，少不了一個熱字當頭，電扇空調(diào)陸續(xù)登場，每逢此時，總會想起那一把蒲扇。蒲扇，是記憶中的農(nóng)村，夏季經(jīng)常用的一件物品。　　記憶中的故鄉(xiāng)，每逢進入夏天，集市上最常見的便是蒲扇、涼席，不論男女老少，個個手持一把，忽閃忽閃個不停，嘴里叨叨著“怎么這么熱”，于是三五成群，聚在大樹下，或站著，或隨即坐在石頭上，手持那把扇子，邊嘮嗑邊乘涼。孩子們卻在周圍跑跑跳跳，熱得滿頭大汗，不時聽到“強子，別跑了，快來我給你扇扇”。孩子們才不聽這一套，跑個沒完，直到累氣喘吁吁，這才一跑一踮地圍過了，這時母親總是，好似生氣的樣子，邊扇邊訓，“你看熱的，跑什么？”此時這把蒲扇，是那么涼快，那么的溫馨幸福，有母親的味道！

2、　　蒲扇是中國傳統(tǒng)工藝品，在我國已有三千年多年的歷史。取材于棕櫚樹，制作簡單，方便攜帶，且蒲扇的表面光滑，因而，古人常會在上面作畫。古有棕扇、葵扇、蒲扇、蕉扇諸名，實即今日的蒲扇，江浙稱之為芭蕉扇。六七十年代，人們最常用的就是這種，似圓非圓，輕巧又便宜的蒲扇。　　蒲扇流傳至今，我的記憶中，它跨越了半個世紀，也走過了我們的半個人生的軌跡，攜帶著特有的念想，一年年，一天天，流向長長的時間隧道，裊最新[臨床醫(yī)學]體外分析技術核醫(yī)學-藥學醫(yī)學精品資料定義以放射核素標記（或其他非放射性標記）的配體(Ligand)為示蹤劑，以配體和結合體的結合反應為基礎，在試管內(nèi)進行的微量生物活性物質(zhì)的檢測技術。體外分析

3、技術是結合了放射性核素的高靈敏度和特異性結合反應的高特異性的一種超微量分析技術，具有靈敏度高、特異性強、精密度好、應用面廣、方法簡便等優(yōu)點。體外分析技術體外放射分析體外非放射分析放射性競爭結合分析放射性非競爭結合分析放射免疫分析(RIA)免疫放射分析酶免疫分析化學發(fā)光免疫分析熒光免疫分析(IRMA)(EIA)(CLIA)(FIA)第一節(jié)放射免疫分析法(Radioimmunoassay)Dr.Yalow在體外條件下,利用Ag與定量的*Ag對限量的特異性Ab的競爭結合反應，通過測定放射性復合物的量來計算出Ag量的一種超微量分析技術。一、基本原理Ag-Ab+Ag*AgAbAg++*Ag-Ab+*Ag

4、(B)(F)*Ag與Ag免疫活性相同*Ag＋Ag>AbAg=*Ag,AgAb=*AgAbAg>*Ag,*AgAb(B)*Ag(F)Ag<*Ag,*AgAb(B)*Ag(F)Ag*AgAb*AgAbAgAb*Ag++++++++++++++++++++Ag2550100200400800*AgAb分離B、FB%=B/(B+F)F%=F/(B+F)R=B/FB1%B2%B3%B4%B5%B6%123456濃度B%標準曲線Ag2550100200400800*AgAb分離B、FB1%B2%B3%B4%B5%B6%123456B%？60在實際的操作中，我們一般要設立以下幾個反應管：1．最大結合管（Bo

5、）：標準抗原的量為0，只有標記抗原和特異性抗體時，標記抗原與抗體充分反應后分離B和F，所測得的B的放射性為Bo。這是沒有標準抗原與之競爭時，標記抗原和抗體的結合達最大值。2．非特異結合管（NSB）：標記抗原除了要和特異性抗體結合以外，還要和一些雜質(zhì)蛋白或容器的管壁等結合，對我們的分析結果產(chǎn)生影響。NSB管是用蒸餾水代替特異性抗體，在相同條件下反應后測得的放射性。3．總放射性管（T）：反應后不分離就直接測得的放射性就是總放射性。表示標記抗原抗體復合物和游離的標記抗原的總放射性。4．標準管（B1~Bn）：放有不同濃度的標準抗原，再加入相同量的標記抗原和特異抗體。一般在反應后分離出沉淀，測定沉淀的放

6、射性作為B。5．樣品管（Bx）：用同劑量的樣品代替標準管中的標準抗原，在相同條件下反應和分離，同樣取沉淀測得其放射性，就可以在繪制的標準曲線上找到樣品的濃度。常用的有B%，B/F，B/Bo，F(xiàn)/B，Bo/B等這些反應變量都可以用作縱坐標來對應標準抗原的濃度作標準曲線，選用的反應變量不同，標準曲線的形狀也不同。但是這些標準曲線都是反映的反應變量對應標準抗原濃度變化而變化的函數(shù)關系。標準曲線左：橫座標為等份刻度；　右：橫座標為對數(shù)刻度操作基本步驟1、加樣：加樣總體積要保持一致，所處的介質(zhì)環(huán)境也要一致。2、孵育：根據(jù)不同的分析對象孵育的溫度和時間不同，一般是37℃。3、分離：選擇好的分離方法分離游

7、離抗原和抗原－抗體復合物。4、測量：測量游離或結合物部分的放射性。5、數(shù)據(jù)處理：繪制標準曲線和待測物濃度的計算。二、基本方法㈠基本試劑1、抗體2、標記抗原3、非標記標準抗原（標準品）2、標記抗原1）比活度和放化純度足夠高比活度——每微克抗原上標記放射性核素的千貝可數(shù)（KBq/μg）放化純度——具有免疫活性的標記抗原占總放射性的百分數(shù)。>90%2）半衰期足夠長3）保持原有抗原的特性大分子：125I小