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1、分類號：R735.2密級：公開研究生學(xué)位論文論文題目（中文）α烯醇化酶基因調(diào)節(jié)胃癌增殖及其機(jī)制研究TheStudyontheproliferationandits論文題目（外文）MechanismofENO1ingastriccancer研究生姓名喬慧學(xué)科、專業(yè)臨床醫(yī)學(xué)·外科學(xué)研究方向消化道腫瘤學(xué)位級別博士導(dǎo)師姓名、職稱關(guān)泉林教授論文工作起止年月2014年11月至2018年9月論文提交日期2018年10月論文答辯日期2018年12月學(xué)位授予日期2018年12月校址：甘肅省蘭州市α烯醇化酶基因調(diào)節(jié)胃癌增殖及其機(jī)制研究中文摘要α-烯醇化酶基因（ENO1）是糖酵解過程中的一種代謝酶，催化2-磷酸甘油
2、酸轉(zhuǎn)化磷酸烯醇式丙酮酸。ENO1在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用，但是尚未有研究報道ENO1在胃癌中的作用，因此其在胃癌中的具體功能和發(fā)揮作用的分子機(jī)制有待深入研究。目的檢測ENO1基因在人胃癌組織及癌旁組織中的表達(dá)量，研究ENO1基因在胃癌發(fā)生發(fā)展中的重要生物學(xué)功能，并深入探討其參與胃癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制。方法1.首先通過免疫組織化學(xué)染色檢測ENO1在胃癌腫瘤組織及癌旁組織中的表達(dá)情況，并與TCGA數(shù)據(jù)庫中的結(jié)果進(jìn)行比較；應(yīng)用Kaplan-Meier法分析ENO1基因表達(dá)量與胃癌患者預(yù)后的相關(guān)性。2.應(yīng)用RNA干擾技術(shù)靶向沉默胃癌細(xì)胞株ENO1基因的表達(dá)，通過CCK8實(shí)驗、克隆形成實(shí)驗、凋亡實(shí)
3、驗、細(xì)胞周期實(shí)驗及劃痕實(shí)驗檢測ENO1對胃癌細(xì)胞株生物學(xué)功能的影響。3.應(yīng)用Affymetrix人類全基因表達(dá)譜芯片檢測ENO1基因干擾前后胃癌細(xì)胞株MGC-803中全基因組mRNA表達(dá)豐度。應(yīng)用Ingenuity通路分析差異表達(dá)基因，并尋找下游潛在的候選基因。使用qRT-PCR技術(shù)分別檢測干擾ENO1后下游通路基因的mRNA表達(dá)水平的改變。結(jié)果1.ENO1在胃癌組織中的表達(dá)水平顯著高于癌旁組織，其在胃癌細(xì)胞中的表達(dá)水平高于正常胃上皮細(xì)胞。并且高表達(dá)ENO1的胃癌患者較低表達(dá)ENO1的胃癌患者生存率低。2.敲低ENO1可以顯著抑制胃癌細(xì)胞的增殖和克隆形成能力，敲低ENO1可以誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞發(fā)生凋
4、亡，并且可以導(dǎo)致S期細(xì)胞周期阻滯，提示ENO1可能通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡進(jìn)而影響其增殖。同時，敲低ENO1之后可以顯著抑制胃癌細(xì)胞的遷移能力。3.通過mRNA表達(dá)譜芯片檢測發(fā)現(xiàn)，干擾ENO1可以導(dǎo)致下游681個基因的表達(dá)發(fā)生改變，并且IPA分析發(fā)現(xiàn)，敲低ENO1可以抑制HGF/PI3K/AKT/c-Fos信號通路的活性。進(jìn)一步干擾ENO1可以上調(diào)MAP3K20mRNA和DET1mRNAI的表達(dá)水平，并下調(diào)c-FosmRNA和SBDSmRNA的表達(dá)水平。結(jié)論1.ENO1參與胃癌的發(fā)生發(fā)展，ENO1可能在胃癌中扮演“癌基因”的作用。2.ENO1可能通過HGF/PI3K/AKT/c-Fos信號軸促進(jìn)胃癌細(xì)
5、胞的增殖和遷移。3.ENO1有望成為胃癌潛在的診斷標(biāo)志物，并為胃癌發(fā)生發(fā)展的機(jī)制探討以及藥物靶標(biāo)的篩選提供理論依據(jù)。關(guān)鍵詞：α烯醇化酶，胃癌，糖酵解，增殖，凋亡IITheStudyontheproliferationanditsMechanismofENO1ingastriccancerAbstractα-Enoase(ENO1)geneisaglycolyticenzymethatcatalyzestheconversionof2-phosphoglyceratetophosphoenolpyruvate.ENO1iswidelyexpressedinvarioushumantissuesa
6、ndplaysanimportantroleinthedevelopmentandprogressionofvarioustumors.However,theroleofENO1ingastriccancerisunclear.Thus,thespecificfunctionandmolecularmechanismofENO1ingastriccancerneedtobefurtherstudied.ObjectiveTheaimofpresentstudyaretodetecttheexpressionlevelofENO1inhumangastriccancertissuesandmat
7、chednon-cancertissues,exploreitsbiologicalfunctioningastriccancer,andelucidatetherelatedmechanism.Method1.ImmunohistochemicalstaningwasusedtodetecttheexpressionofENO1ingastriccancertissuesandadjacentt
