產(chǎn)幾丁質(zhì)酶菌株的篩選及酶解產(chǎn)物鑒定

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1、糧油食品科技第21卷2013年第2期生物工程產(chǎn)幾丁質(zhì)酶菌株的篩選及酶解產(chǎn)物鑒定112譚海剛，李靜，趙祥穎(1．青島農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東青島266109;2．山東省食品發(fā)酵工程重點實驗室，山東濟南250013)摘要:幾丁質(zhì)酶是一種專一性降解幾丁質(zhì)的水解酶。在工業(yè)上，幾丁質(zhì)酶可用于制備功能性甲殼低聚糖。結(jié)合平板透明圈法和搖瓶發(fā)酵測酶活力的方法，從土壤中篩選到一株產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的菌株L012，酶活力為0．75IU/mL;采用離子色譜法對菌株L012產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的酶解產(chǎn)物進行分析，初步確定產(chǎn)物中有氨基葡萄糖、乙酰氨基葡萄糖以及聚合度小于10的寡糖。關(guān)鍵詞:幾丁質(zhì);幾丁質(zhì)酶;幾丁

2、寡糖中圖分類號:TS201．3文獻標(biāo)識碼:A文章編號:1007－7561(2013)02－0065－03Screeningofthestrainsproducingchitinaseandidentificationofitshydrolysisproducts112TANHai－gang，LI－Jing，ZHAOXiang－ying(1．CollegeofFoodScience＆Engineering，QingdaoAgriculturalUniversity，QingdaoShandong266109;2．ShandongKeyLaboratoryofFood＆Ferme

3、ntationEngineering，JinanShandong250013)Abstract:Chitinaseisakindofhydrolasewhichdegradespecificallychitin．Chitinasehavebeenusedforpreparationoffunctionalchito－oligosaccharides．Combinedwithplateculturemethodandshake－flaskscreening，L012wasisolatedastheaimstrain，itsenzymeactivitywas0．75IU/mL．A

4、fteranalyzingthehydrolysisproductsofstrainL012byionchromatography，therewereglucosamine，eacetylglucosamineandoligosaccharideswiththedegreeofpolymerizationlessthan10．Keywords:chitin;chitinase;chitooligosaccharides幾丁質(zhì)酶專一性降解幾丁質(zhì)，水解得到的幾丁1．2主要試劑寡糖、幾丁二糖或N－乙酰葡萄糖胺在食品及藥物膠體幾丁質(zhì)(Colloidalchitin):按SunChul

5、［2］方面有廣泛的用途。幾丁質(zhì)酶(chitinase，EC3．4．1．Kang的方法制備，細粉幾丁質(zhì):濟南海得貝公司，［1］14)的酶源相當(dāng)豐富，自從Benecke首次報道分離DNS試劑:參照文獻［3］，磷酸緩沖液:參照文獻到幾丁質(zhì)酶產(chǎn)生菌以來，發(fā)現(xiàn)微生物中細菌、放線［4］，其他試劑均為分析純。菌、真菌、酵母及某些病毒都能夠產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶。不1．3培養(yǎng)基同來源的微生物的酶系有所不同，酶學(xué)性質(zhì)差異較1．3．1富集培養(yǎng)基大。一般微生物產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的酶系含有外切幾丁質(zhì)細粉幾丁質(zhì)2．5g/l，MgSO4·7H2O0．5g/l，酶、內(nèi)切幾丁質(zhì)酶和幾丁質(zhì)二糖酶等。K2HPO40．7g/l，K

6、H2PO40．3g/l，F(xiàn)eSO4·7H2O本文采用平板透明圈法和搖瓶發(fā)酵相結(jié)合的方0．01g/l，pH7．0～7．2，121℃滅菌20min。法從土壤等樣品中篩選到一株產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的菌株，1．3．2平板分離培養(yǎng)基并用離子色譜法對該菌株酶解產(chǎn)物進行了分析、鑒膠體幾丁質(zhì)2．5g/l，K2HPO40．7g/l，KH2PO4定。0．3g/l，MgSO4·7H2O0．5g/l，F(xiàn)eSO4·7H2O0．011材料與方法g/l，瓊脂15g/l，pH7．0，121℃滅菌20min。1．1土樣1．3．3斜面培養(yǎng)基［4］。采自山東沿海等地區(qū)的土樣。參考文獻［4］1．3．4搖瓶篩選培養(yǎng)基細粉幾丁質(zhì)

7、10g/l，蛋白胨5g/l，酵母膏5g/l，收稿日期:2012－10－23KHPO0．7g/l，KHPO0．3g/l，MgSO·7HO0．5242442基金項目:山東省科技攻關(guān)計劃項目(031010115)作者簡介:譚海剛，1979年出生，男，山東臨朐人，碩士．g/l，F(xiàn)eSO4·7H2O0．01g/l，ZnSO40．01g/l，pH通訊作者:李靜，1981年出生，女，碩士，講師．7．0，121℃滅菌20min。瑔瑥生物工程糧油食品科技第21卷2013年第2期1．4培養(yǎng)方法表1顯示:菌株L012產(chǎn)酶活