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《產(chǎn)柚苷酶高產(chǎn)菌株的篩選、鑒定與產(chǎn)酶特性研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、四川農(nóng)業(yè)大學2008屆碩士研究生畢業(yè)論文摘要利用脫苦酶實現(xiàn)蜜柚的脫苦，對營養(yǎng)成分無破壞，不影響或改變柚汁或蜜柚果酒的天然良好風味，是最理想和最具產(chǎn)業(yè)化應用前景的方法，也是目前該領域的研究熱點。本課題以自然界得到的菌株為出發(fā)菌株，對脫苦酶中最主要的一種酶一柚菅酶的高產(chǎn)菌株篩選、菌種鑒定，發(fā)酵產(chǎn)酶的周期規(guī)律，酶活力檢測方法的比較以及粗酶的基本性質進行了研究。本文首先對由本實驗室從發(fā)霉的蜜柚果皮、腐爛柚果堆積處的土壤處分離篩選得到的共60株真菌菌株進行了篩選。柚苷酶是一種誘導酶，含柚皮苷粉或苦味物丙酮提取液的
2、培養(yǎng)基是該菌株的最佳誘導產(chǎn)酶培養(yǎng)基。采用透明圈法和平板劃線法對菌株進行了初步的純化分離，將所分離得到的純菌株接種子以O．5％柚皮苷粉為產(chǎn)酶誘導物的選擇性固體平板培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)5d，通過觀察其生長情況對菌株進行初篩；將初篩菌株接種到以0．5％柚皮苷粉為產(chǎn)酶誘導物的液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，28℃、160rmp搖床培養(yǎng)5d，經(jīng)臺式中型低溫離心機離心(3500rpm，15min)后取粗酶液，用Davis法測定酶活，篩選出一株實驗室編號為P一61的菌株所產(chǎn)酶的酶活最高，為310．64，于是決定以該菌株做為后續(xù)研究
3、的目標菌株。通過對該菌株的有性觀察、外觀觀察和顯微鏡觀察得出結論：有性孢子不詳或不發(fā)生，鑒定編號為P．61菌種為有性世代還未被發(fā)現(xiàn)的半知菌類(FungiImperfeetO。分生孢子穗球形，紫褐色至黑色，與叢梗孢科(Moniliaceae)，單孢亞科(A,nerosporoideaeofMoniliaceae)，曲霉族(Aspergilleae)，曲霉屬(AspergillusMich．ex^)，黑曲霉組0．niger)的描述基本上相吻合，因此，鑒定為此株菌為黑曲霉。本實驗對黑曲霉P-61的發(fā)酵產(chǎn)酶規(guī)律
4、進行了研究，對比了利用紫外分光光度計測定柚苷酶酶活性的Davis法和高效液相色譜法的優(yōu)劣之處，在相同的發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)條件下，通過對柚苷酶的發(fā)酵產(chǎn)酶培養(yǎng)基中還原糖含量、柚皮苷含量、柚苷素含量和柚苷酶酶活隨培養(yǎng)時間增加而變化的趨勢觀察，得出結論：以柚皮苷溶液濃度1．59／L為為菌體生長誘導底物的液體發(fā)酵培養(yǎng)基的產(chǎn)酶情況最為穩(wěn)定；用Davis法測定酶活速度快，但可能受到柚皮苷降解的中間產(chǎn)物的干擾，準確度較差，用高效液相色譜法測定酶活性，雖然前處理和開機操作比較煩瑣，但測定結果的準確度較高，受到的干擾小。四川農(nóng)業(yè)
5、大學2008屆碩士研究生畢業(yè)論文最后，本實驗對28℃、160rpm搖床培養(yǎng)5d后的培養(yǎng)液，于4"C，用冷凍離心機經(jīng)5000×g離心15min得到的粗酶液的酶學性質進行了基礎性的研究。確定采用二次沉淀法，先用30％的硫酸銨沉淀除去雜蛋白，再用60％硫酸銨沉淀鹽析出柚苷酶。經(jīng)過SDS-PAGE，確定了P．61菌株所產(chǎn)粗酶液5倍超濾濃縮后的分子量，約為100KDa。酶活性及穩(wěn)定性隨環(huán)境而變化，在pH4．0和溫度為50℃時，酶的活性最高；溶液的離子種類對此黑曲霉P-61所產(chǎn)的酶活性有一定影響，Ca2+(5mol
6、／L)對此粗酶有相對較強的激活作用，Zn2+、K+、EDTA對酶有很強的抑制作用。關鍵詞：柚苷酶、篩選、菌種鑒定、產(chǎn)酶規(guī)律、酶學性質四川農(nóng)業(yè)大學2008屆碩士研究生畢．業(yè)論文StudiesontheScreeningandIdentificationofStrainswithHighNaringinaseandItsEnzymeProdcuingCharacteristicsGuoQian(FoodScience)DirectedbyWuYinglong(Professor)、NiHui(Associa
7、teProfessor)AbstractThispaperconsiderstheutilizationofdebitteringenzymetoreducepomelo’Sbitternesswithoutdestroyingnutritionalcomposition．Noeffectoralterationtothenaturalgoodflavorofpomelojuiceorpomelowineiscaused．Itisthebestmethodofindustralizationapplic
8、ationforeground．Inaddition，itisalsoafocusresearchinthisfield．Thistopicusesthestrainsisolatedfromnatureastheoriginalstrains．Thisresearchfocuesononeofthemainenzymesofdebittering，enzyme-naringinase．Thisresearchentailsscreenin
