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《家蠶性別決定相關基因Bmrbp1的克隆及原核表達》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、家蠶性別決定相關基因蚴J『的克隆及原核表達特種經濟動物飼養(yǎng)專業(yè)碩士研究生王子龍指導教師夏慶友(摘要)家蠶是重要的經濟昆蟲，更是經典遺傳學研究的模式生物之一。許多研究證明雄蠶比雌蠶抗性好，體質強，葉絲轉化率高，單養(yǎng)雄蠶可在不增加成本的前提下提高15％的產絲量，兩且雄蠶絲纖度細、偏差小，絲質好，利于繅制高檔生絲。因此，研究家蠶的性別決定機制，最終實現(xiàn)單養(yǎng)雄蠶可以有效地提高蠶業(yè)生產效率和經濟效益。同時鱗翅目昆蟲是主要的農林害蟲，而家蠶是鱗翅曰昆蟲的典型代表，解明家蠶的性別決定機制，以家蠶的性別決定機制為模式，有助于開展農林
2、害蟲防治的研究。經典遺傳學研究表明家蠶的性別dnW染色體上的一個強雌性決定因子(fern)決定，而到目前為Ikfe施沒有鑒定出來，在家蠶中已經找到了果蠅性別決定級聯(lián)末端基因dsx的同源體基因Bnzds,Y，與果蠅中的dsx*N以，Bmdsx的初級轉錄物在雌性和雄性中通過選擇性拼接產生性別特異性成熟mRNA，編碼雄特異性(BmDSZg，)和雌特異性(Bm3SXf)蛋自從麗決定家蠶性別的末端分化。但是aaldsx基因前體mRNA的選擇性拼接機制與桑蠅向不同，果蠅中默認的拼接方式為雄特異性，在雌性中tra／tra-2F我活
3、了雌特異性拼按，而家蠶中Bmdsx默認的拼接方式為雌特異性的，雄性中由于受到一個阻遏物的作用而產生雄特異性拼接形式。rbpl是參與果蠅前體mRNA雌特異-眭拼接的一個重要拼接因子，本文對該基因在家蠶中的同源體8mrbpl進行T研究。本研究的內容與結果為：(1)利用家蠶EST數(shù)據(jù)克隆了果蠅Bmrbpl基因在家蠶中的同源體BmrbpI，其tnRNA全長820bp，編碼142個氨基酸的蛋白，分子量為16．79kO．等電點為1158，N端含有一個RRM結構域，C端含有一個RS結構域，氨基酸序列比對分析表明Bmrbpl與rbp
4、l的氨基酸序列相似性達到77％，將rnRNA序列與家蠶基因組序列比較表明Bzarbpl由5個外顯子和4個內含子組成，且所有的外顯子／內含子拼接邊界均符合經典的GT—AG規(guī)則。(2)為了研究Bmrbpl基因在家蠶雌雄各組織中的表達情況，以家蠶脂肪體(雌雄)、絲腺(雌雄)、中腸(雌雄)、體壁(雌雄)、頭部(雌雄)、精巢、卵巢eDNA為模板進行RT—PCR擴增．RT—PCR結果表明BmTbpl基因在所檢測的家蠶雌雄各組織中均有表達。為r進一步研究Bmrbpl基因在家蠶雌雄中是否有表達差異，根據(jù)已經克隆的mRNA序列毆計熒光
5、定量PCR玨南大學碩士學位論文引物和探針t以家蠶剛化蛹eDNA為模板，通過熒光定量PCR分析表明Bmrbpl在家蠶雌雄中并無表達差異，(3)以pET～28a(+)為表達載體，將Bmrbpl基因整個編碼區(qū)亞克隆到pET-28a(+)發(fā)達載體構建成重組表達質粒，轉化到BL21表達菌株，挑取單克隆先在24。C下振蕩培養(yǎng)，當0D值達到06時加入終濃度為1枷的[PTG．在37℃240rpm／min誘導4小時，以轉化有pET～28a(+)空載體的菌和未誘導的轉化菌為對照．經SDS—PAGE電泳誘導菌出現(xiàn)約z1kD的目的蛋白帶，說
6、明該基因編碼的蛋白得到表達。關鍵詞：性別決定原核表達拼接因子基因克隆CloningandprokaryoticexpressionoftheBombyxmoriBmrbpJ『gene，relatedtothesexdeterminationRaisingofSpecialeconomicanimalmasterWangzilongAdvisiorProf．Xiaqingyou(Abstract)Bombyxmoriisnotonlyariimportanteconomicinsect，butalsooneofthem
7、odelorganismsforclassicalgeneticsresearch．Manyresearchesshownthatmaleisbetterthanthefemaleinsuchcharacteristicsastheresistibility，health，ratiooftheleave-silktransformation，Rearing-male-onlycanbringabout15％increaseinthesilkproductionwithoutanincreaseincost，moreo
8、ver,thesilkproducedbymaleisbetterinqualitythanthefemale，therefore，researchthesexdeterminationmechanismintheBombyxmori，andfinallyrearchthegoaloftherearing-male—onlywilleffect
