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《生淀粉酶細(xì)菌菌株的篩選及其酶學(xué)性質(zhì)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、糧油食品糧油食品科技第20卷2012年第5期生淀粉酶細(xì)菌菌株的篩選及其酶學(xué)性質(zhì)研究譚海剛，李靜(青島農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，山東青島266109)摘要:分離篩選到一株生淀粉酶酶活較高的菌株QD006，通過(guò)形態(tài)和常規(guī)生理生化鑒定，初步確定該菌為Staphylococcusintermedius。該菌產(chǎn)生的生淀粉酶最適溫度為50℃，最適pH為6．5，該酶++2+3+2+2+具有良好的熱穩(wěn)定性。Na、K、Ca對(duì)該酶有激活作用，F(xiàn)e、Zn和Cu對(duì)該酶有抑制作用。關(guān)鍵詞:生淀粉糖化酶;細(xì)菌;酶學(xué)性質(zhì)中圖分類號(hào):TS201．3文獻(xiàn)標(biāo)
2、識(shí)碼:A文章編號(hào):1007－7561(2012)05－0056－03StudyonisolationofbacterialstrainsofrawstarchglucoamylaseanditsenzymaticpropertiesTANHai－gang，LIJing(CollegeofFoodScience＆Engineering，QingdaoAgriculturalUniversity，QingdaoShandong266109)Abstract:AstrainQD006withhigheractivityofraw－
3、starchglucoamylasewasisolatedandprimitivei-dentifiedasStaphylococcusintermediubymorphologyandconventionalbiochemicalidentification．Theenzymaticpropertyrevealedthatoptimumtemperaturewasat50℃andpH6．5．Theenzymehadgood++2+3+2+thermalstability．Theenzymeactivitywasactiva
4、tedbyNa，KandCaandrestrainedbyFe，Zn2+andCu．Keywords:rawstarchglucoamylase;bacteria;enzymaticproperty生淀粉糖化酶一般指可以直接作用、水解或糖1．2培養(yǎng)基化未經(jīng)蒸煮的淀粉顆粒的酶，可能包括α－淀粉酶、平板分離培養(yǎng)基:可溶性淀粉3g、蛋白胨10g、［1－2］β－淀粉酶、葡萄糖淀粉酶、普魯藍(lán)酶等酶。它NaCl5g、瓊脂20g、蒸餾水1000mL，pH7．2～7．4，可以將淀粉傳統(tǒng)工藝中的糊化、液化和糖化合并為121℃滅菌20min。其
5、中可溶性淀粉在105℃下干一步直接進(jìn)行糖化，如果將其應(yīng)用于無(wú)蒸煮的酒精熱滅菌2h，然后在65℃下無(wú)菌操作加入。［3－4］發(fā)酵，可節(jié)約總能耗的30%～40%。已發(fā)現(xiàn)的液體發(fā)酵培養(yǎng)基:可溶性淀粉3g、蛋白胨10g、能產(chǎn)生淀粉酶的微生物種類較多，報(bào)道最多的是黑NaCl5g、蒸餾水1000mL，pH7．2～7．4，121℃滅菌［5－6］曲霉、根霉和芽孢桿菌。本文篩選出能產(chǎn)生淀20min。其中可溶性淀粉在105℃下干熱滅菌2h，粉酶的細(xì)菌，對(duì)其進(jìn)行初步鑒定并進(jìn)行了酶學(xué)性質(zhì)然后在常溫下無(wú)菌操作加入。的研究。1．3菌種篩選方法1材料與方法
6、初篩:變色圈法，選擇圈徑比較大的菌落，進(jìn)一1．1土樣校內(nèi)食堂垃圾附近的土壤。步劃線分離后，進(jìn)行產(chǎn)酶測(cè)定。復(fù)篩:測(cè)酶活，選擇酶活高的菌株作為目的菌株。1．4生淀粉酶活的測(cè)定方法收稿日期:2012－03－20作者簡(jiǎn)介:譚海剛，男，1979年出生，山東臨朐人，講師．酶活力測(cè)定方法:將發(fā)酵液在4℃，8000r/min瑓瑦糧油食品科技第20卷2012年第5期糧油食品下離心30min后取上清液，再通過(guò)抽濾得到的濾液QD006和QD007做斜面保藏并通過(guò)搖瓶復(fù)篩，得到為粗酶液，取1mL粗酶液，加入到19mLpH6．5的QD006酶活力最
7、高，達(dá)到10．18U/mL，確定為目標(biāo)檸檬酸鹽緩沖液中，再加入0．5g的可溶性淀粉為菌株。底物，30℃水解2h后用0．5mL4%的NaOH溶液表1生淀粉糖化酶菌種篩選結(jié)果終止反應(yīng)。反應(yīng)液在4000r/min下離心5min，用菌種編號(hào)圈徑比菌種編號(hào)圈徑比DNS法測(cè)定上清液中還原糖量，測(cè)定540nm處的吸QD0015．1QD0054．7光度(在酶活測(cè)定體系中，以純水取代粗酶液作為QD0023．2QD0065．8空白)，查葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線得到水解產(chǎn)物中葡萄糖QD0033．6QD0075．2的量，從而確定生淀粉糖化酶的酶活力大小。QD
8、0043．9QD0083．5酶活力定義:在pH6．5、溫度為30℃保溫1202．2菌種鑒定min條件下，1min產(chǎn)生1μg葡萄糖所需要的酶的QD006的菌落較小，較薄，較透明且“細(xì)膩”，邊量規(guī)定為1個(gè)酶活力單位(U)。緣光滑，革蘭氏染色確定該菌為革蘭氏陽(yáng)性菌;經(jīng)顯1．5菌種鑒定微觀察呈球形
