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《磺胺甲噁唑單抗制備及膠體金免疫層析試紙條的研制》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、中文摘要磺胺甲嗯唑(SMZ)，在獸醫(yī)臨床上主要用于呼吸道和泌尿道感染的治療，具有抗菌譜廣、療效確切、性質(zhì)穩(wěn)定、使用方便、價(jià)格低廉等諸多優(yōu)點(diǎn)。但不合理的用藥，可導(dǎo)致磺胺類(lèi)藥物在可食用動(dòng)物組織中的殘留，對(duì)食品安全和人類(lèi)健康造成危害。有必要建立一系列有效的方法，以滿足不同條件下動(dòng)物性食品中SMZ殘留的檢測(cè)。目前，SMZ殘留的檢測(cè)方法主要有，微生物法、色譜技術(shù)、免疫學(xué)分析法。為探索并建立一種能夠簡(jiǎn)單、快速、適量檢測(cè)SMZ殘留的方法，本研究在利用雜交瘤技術(shù)制備了靈敏度高、特異性強(qiáng)、效價(jià)高的單抗，在建立動(dòng)物性食品中SMZ殘留的ELISA測(cè)定方法基礎(chǔ)上研制了SMZ金標(biāo)檢測(cè)試紙條。1、SMZ全抗原的合成。
2、磺胺甲噫唑?qū)儆诎肟乖?，分別用重氮法、戊二醛法和碳二亞胺法制備SMZ與牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)和入血清白蛋白(HSA)的完全抗原，作為包被原和免疫原。完全抗原SMZ．BSA，SMZ．OVA和SMZ．HSA純化后通過(guò)紫外掃描進(jìn)行檢測(cè)，確認(rèn)SMZ已經(jīng)偶聯(lián)到蛋白上。并計(jì)算出藥物SMZ和載體蛋白BSA、OVA和HSA分子結(jié)合比為23．3：1、17．7：1和24．5：1。2、SMZ單抗的制備。用重氮法合成的完全抗原SMZ．BSA免疫7周齡BALB／C小鼠，利用單克隆抗體技術(shù)和現(xiàn)代細(xì)胞融合技術(shù)獲得一株可持續(xù)分泌針對(duì)藥物SMZ抗體的雜交瘤細(xì)胞株1C5，將細(xì)胞株1C5接種至UIJ,鼠體內(nèi)，
3、采用誘生腹水法制備了抗SMZ的腹水，其蛋白濃度為24．9mg／mL，效價(jià)達(dá)1：80000以上，SMZ藥物競(jìng)爭(zhēng)抑制標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0．3068x+0．0824(R2=0．9955)，IC50為22．9ng／mL，LOD為1．02ng／mL，LOQ為5．39ng／mL。交叉實(shí)驗(yàn)表明，SMZ抗體對(duì)磺胺喹噫啉(sQ)、磺胺嘧啶(SD)、磺胺對(duì)甲氧嘧啶(SMD)、磺胺噻唑(ST)、磺胺鄰--EV氧嘧啶(SDM’)、磺胺醋酰(SA)等7種藥物均無(wú)交叉反應(yīng)。3、SMZ膠體金免疫層析試紙條研制。實(shí)驗(yàn)采用檸檬酸三鈉還原法制25rim膠體金，鑒定質(zhì)量后，標(biāo)記單克隆抗體。將金標(biāo)抗體噴涂在Ahlstrom896
4、4玻璃纖維素上，特異性抗原包被在Milliporel35硝酸纖維素膜上，制成快速檢測(cè)試紙條。并對(duì)SMZ膠體金免疫層析試紙條的各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行優(yōu)化，并確定了最佳條件，成功建立膠體金免疫層析檢測(cè)SMZ殘留的方法。使用試紙條對(duì)SMZ標(biāo)準(zhǔn)液檢測(cè)，檢測(cè)限為lOOng／mL。交叉實(shí)驗(yàn)表明，試紙條對(duì)SQ、SD、SMD、ST、SDM’、SA等6種藥物均無(wú)交叉反應(yīng)。4、SMZ添加回收實(shí)驗(yàn)。本研究對(duì)應(yīng)用磺胺甲嗯唑較多的動(dòng)物性食品進(jìn)行了添加旦中文摘要回收試驗(yàn)。用ELISA方法測(cè)得在牛奶中藥物添加回收率為92．4％--．．112．6％，在雞蛋中的添加回收率分別為86．9％～128．2％，在雞肉中的添加回收率為68．4
5、％～84．5％。并用試紙條檢測(cè)處理樣品進(jìn)行驗(yàn)證，雞肉樣品的檢測(cè)準(zhǔn)確率為91．7％，雞蛋樣品檢測(cè)準(zhǔn)確率為87．5％，雞肉樣品檢測(cè)準(zhǔn)確率為83．3％。結(jié)果表明試紙條能夠基本滿足檢測(cè)要求。本實(shí)驗(yàn)建立的對(duì)動(dòng)物性食品中磺胺甲嗯唑殘留的ELISA檢測(cè)和GICA檢測(cè)方法，方便、快速、準(zhǔn)確，適用于對(duì)SMZ殘留的快速檢測(cè)，本研究也為其他獸藥殘留檢測(cè)方法的研究提供借鑒。關(guān)鍵字：磺胺甲嗯唑；單克隆抗體；ELISA；膠體金免疫層析試紙條；殘留檢測(cè)ABSTRACTIntheveterinaryclinic，Sulfamethoxazole(SMZ)ismainlyusedtotreatrespiratoryandu
6、rinarytractinfection．Ithaswideantibioticspectrum，formalcurativeeffect，stableproperty,easetouse，inexpensive，andmanyotheradvantages．FoodderivedfromanimalstreatedwithSulfamethoxazolemaybecontaminatedwiththisdrugswillinfluencehumanhealthbecauseofabuseofSulfamethoxazole．Thereby，weneedestablishaseriesof
7、effectivemethodstomeetdifferentconditionsofanimalSMZresiduesdetectioninfood．Atpresent，themainmethodusedforsulfonamidesdetectionincludemicrobiologicalmethod，chromatography，immunologyanalysis，etc．Asarapid，specifica
