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《轉(zhuǎn)基因小麥外源基因插入位點(diǎn)初步分析及檢測方法的建立》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、生物工程糧油食品科技第卷年第期轉(zhuǎn)基因小麥外源基因插入位點(diǎn)初步分析及檢測方法的建立口段曉亮，許蘭杰劉志勇、梁榮奇中國農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物技術(shù)學(xué)院，北京國家糧食局科學(xué)研究院，北京摘要：利用染色體步移（原理和巢式方法，對轉(zhuǎn)基因小麥外源基因插入位點(diǎn)的序列特征進(jìn)行了分析，并以此建立了基因轉(zhuǎn)化事件特異性檢測的方法。根據(jù)基因的核苷酸序列設(shè)計(jì)特異引物，利用公司提供的簡并隨機(jī)引物，通過染色體步移法擴(kuò)增到了轉(zhuǎn)基因祙系的插入位點(diǎn)的邊界序列，分析得到的邊界序列可知，外源基因片段是通過部分同源重組的方式與小麥基因組進(jìn)行整合的整合位點(diǎn)位于染色體組。檢
2、測結(jié)果顯示攜帶外源基因的質(zhì)粒在與小麥基因組整合的過程中發(fā)生了剪切且啟動子與基因被切除保留了兩個(gè)串聯(lián)的基因，且在區(qū)間發(fā)生了重組后的缺失，而在區(qū)間有一段堿基序列插入導(dǎo)致插入?yún)^(qū)段的小麥基因組序列發(fā)生重排，初步分析外源基因是通過同源重組的方式進(jìn)行整合的。通過驗(yàn)證，證明了插入位點(diǎn)信息的準(zhǔn)確性并初步判斷插入位點(diǎn)位于小麥染色體組。因此，隨機(jī)引物法可以作為轉(zhuǎn)基因小麥安全檢測及身份識別的有效方法。關(guān)鍵詞：；轉(zhuǎn)基因小麥插入位點(diǎn)；邊界序列；檢測方法中圖分類號文獻(xiàn)標(biāo)識碼文章編號，；：一，，：；；；；轉(zhuǎn)基因作物的優(yōu)越性使得其成為解決糧食安全轉(zhuǎn)基因
3、作物帶來巨大效益的同時(shí)，關(guān)于轉(zhuǎn)基因食品的重要手段，隨著轉(zhuǎn)基由作物的大面積推廣應(yīng)用，轉(zhuǎn)的安全性及對生態(tài)環(huán)境的影響等問題也成了關(guān)注的基因產(chǎn)品必將大量地進(jìn)人消費(fèi)市場。然而，在焦點(diǎn)另外，轉(zhuǎn)基因作物品種的專利保護(hù)問題、轉(zhuǎn)基――因產(chǎn)品的標(biāo)識問題也引起了政府與民眾的高度收稿日期；基金項(xiàng)目：轉(zhuǎn)基因生物新品種培育重大專項(xiàng)（關(guān)往。我國于年月日頒布了《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因作者街介：段曉亮男，年出生在讀博士丄二二二通訊作者：梁榮奇男年出生副教授博士生物安全管理?xiàng)l例》，年月日開始頭仃糧油食品科技第卷年第期生物工程的《農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物標(biāo)識管理辦法》規(guī)定，國家對
4、農(nóng)的表型很難預(yù)測。另外由轉(zhuǎn)化基因插入位點(diǎn)的不確業(yè)轉(zhuǎn)基因生物實(shí)行檢驗(yàn)檢疫和標(biāo)識制度一。歐盟已通定性引起的基因表達(dá)水平的不致往往導(dǎo)致轉(zhuǎn)基因過轉(zhuǎn)基因作物試種知情權(quán)法案。通常情況下，轉(zhuǎn)基株系間表達(dá)差異的懸殊。因此，闡明外源基因在植因食品的檢測主要包括核酸和蛋白質(zhì)的檢測，核酸物基因組中的整合機(jī)制對設(shè)計(jì)高效的轉(zhuǎn)化策略具有的檢測主要是檢測遺傳物質(zhì)中是否含有插人的外源重要的意義?；颍鞍踪|(zhì)的檢測主要是通過檢測插入外源基對于轉(zhuǎn)基因作物中外源基因的檢測，國內(nèi)外已因表達(dá)的蛋白質(zhì)產(chǎn)物或其功能經(jīng)形成了一，其檢測技術(shù)方法主系列常用的方法，如競爭
5、要包括基于免疫學(xué)基礎(chǔ)的、法和、實(shí)時(shí)定量』試紙條法等。王曉波等對轉(zhuǎn)基因的大、方法、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)豆進(jìn)行插入位點(diǎn)檢測結(jié)果顯示外源基因的插入導(dǎo)增檢測技術(shù)等。但這些方法均不能明確插入外致一個(gè)編碼和兩個(gè)功能域的基源序列在植物基因組中的位置，而這些信息在因（結(jié)構(gòu)受到影響。國內(nèi)還沒有歐洲和美洲轉(zhuǎn)基因食品安全評價(jià)中是必需提供的資關(guān)于轉(zhuǎn)基因小麥插人位點(diǎn)邊界序列分析的相關(guān)料。我國對于轉(zhuǎn)基因作物的環(huán)境釋放環(huán)節(jié)要報(bào)道。求提供外源基因插入位點(diǎn)的信息但是這方面的研外源基因的轉(zhuǎn)化途徑主要可以概括為個(gè)轉(zhuǎn)化究報(bào)道較少。因此，開展轉(zhuǎn)基因品種的外源基因插體系農(nóng)
6、桿菌介導(dǎo)的植物轉(zhuǎn)化體系、直接導(dǎo)入的轉(zhuǎn)化人位點(diǎn)以及外源基因與受體基因組的整合研究，對體系（基因槍）以及種質(zhì)系統(tǒng)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化體于我國轉(zhuǎn)基因安全評價(jià)具有重要意義。一系一種重。但無論哪種轉(zhuǎn)化方法外源基因的整合機(jī)制染色體步移技術(shù)（是都是一個(gè)未知領(lǐng)域。等人分析了轉(zhuǎn)基因水稻要的分子生物學(xué)研究技術(shù)使用這種技術(shù)可以有效的外源基因以及整合插人位點(diǎn)的序列結(jié)構(gòu)特征提獲取與已知序列相鄰的未知序列，主要用于克隆啟“兩步整合機(jī)制模型”動子出了轉(zhuǎn)基因是通過（、鑒定或轉(zhuǎn)座子的插人位點(diǎn)等研?。進(jìn)行整合的，即究原理：根據(jù)已知序整合前與整合兩個(gè)階段，提出了重組熱
7、點(diǎn)以及轉(zhuǎn)基列，分別設(shè)計(jì)三條同向且退火溫度較高因串聯(lián)子等概念用來解釋整合前階段。而整合階段的特異性引物，與試劑盒中提供的種中外源在整合熱點(diǎn)開始整合進(jìn)受體基因組并經(jīng)過獨(dú)特設(shè)計(jì)的退火溫度較低的兼并引物，即、引導(dǎo)其它轉(zhuǎn)基因分子在鄰近區(qū)域相繼整合，因而也、、進(jìn)行熱不對稱反應(yīng)。通常情況一，其中至種兼并引物可以與特異性引物之就導(dǎo)致了多拷貝出現(xiàn)的問題，不同轉(zhuǎn)基因位點(diǎn)之間下少有被的植物隔開形成轉(zhuǎn)基因簇間利用退火溫度的差異進(jìn)行熱不對稱反應(yīng)，通。對轉(zhuǎn)基因在植物基因組中的整合過次巢式反應(yīng)即可獲取已知序列的側(cè)翼序一位點(diǎn)結(jié)構(gòu)分析表明。如果次實(shí)驗(yàn)獲取
8、的長度不能滿足實(shí)驗(yàn)要求，異常重組可能是轉(zhuǎn)基因整合的列還可以根據(jù)第一主要機(jī)制異常重組包括微同源序列和非同源序列時(shí)，次步移獲取的序列信息，繼續(xù)進(jìn)間的重組盡管轉(zhuǎn)化方法不同，外源基因間的重組連行側(cè)翼序列獲取具體方法原理如圖所示。接點(diǎn)通常具有微同源重組的某些特征一本研究以前期得到的轉(zhuǎn)基因小麥純合株：如兩個(gè)或個(gè)重組末端有核苷酸缺
