轉(zhuǎn)基因柑橘外源基因拷貝數(shù)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)

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1、園藝學(xué)報(bào)，2016，43(6)：1186–1194.ActaHorticulturaeSinica1186doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0081；http：//www.ahs.ac.cn轉(zhuǎn)基因柑橘外源基因拷貝數(shù)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)*許蘭珍，何永睿，雷天剛，彭愛紅，姚利曉，姜國(guó)金，李強(qiáng)，鄒修平，*陳善春（西南大學(xué)/中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院柑桔研究所，國(guó)家柑桔工程技術(shù)研究中心，國(guó)家柑桔品種改良中心，重慶400712）摘要：為分析轉(zhuǎn)基因柑橘中外源基因整合拷貝數(shù)，基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR法，建立通用、準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便的轉(zhuǎn)基因柑橘外源基因拷貝數(shù)檢測(cè)體系，利

2、用該體系成功檢測(cè)了150個(gè)轉(zhuǎn)基因柑橘單株系外源基因整合拷貝數(shù)。結(jié)果表明，轉(zhuǎn)基因柑橘中外源基因整合最低拷貝數(shù)為1，最高達(dá)5個(gè)，其中1、2和≥3拷貝的單株數(shù)分別占總數(shù)的40.0%、18.0%和42.0%；采用Southernblot技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果基本一致，極少數(shù)單株經(jīng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析的拷貝數(shù)比Southernblot檢測(cè)的數(shù)值高。說明本研究建立的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)轉(zhuǎn)基因柑橘外源基因整合拷貝數(shù)更加準(zhǔn)確可靠?？截悢?shù)為1~2的轉(zhuǎn)基因株系可作為將來開展轉(zhuǎn)基因目標(biāo)性狀研究及轉(zhuǎn)基因生物安全性評(píng)價(jià)有利用價(jià)值的試驗(yàn)材料。關(guān)鍵詞：柑橘；實(shí)時(shí)熒光定量PCR；轉(zhuǎn)基因；拷貝數(shù)；So

3、uthernblot中圖分類號(hào)：S666文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：0513-353X（2016）06-1186-09IdentificationoftheCopyNumberofExogenousGeneinTransgenicCitrusbyQuantitativeReal-timePCRXULan-zhen，HEYong-rui，LEITian-gang，PENGAi-hong，YAOLi-xiao，JIANGGuo-jin，LIQiang，**ZOUXiu-ping，andCHENShan-chun（CitrusResearchInstitute，SouthwestU

4、niversity/ChineseAcademyofAgriculturalSciences；NationalCitrusEngineeringResearchCenter；NationalCenterforCitrusVarietiesImprovement，Chongqing400712，China）Abstract：Thecopynumberofexogenousgeneisanimportantfactorinfluencingtheexpressionandgeneticstabilityofthetargetgene.Currently，transgeneco

5、pynumbersbySouthernblot，whichislaboriousandtime-consuming，requiresrelativelylargeamountsofplantmaterialsandmoreexperimentaltechnology.Here，basedonquantitativereal-timePCR（qRT-PCR）technology，aprotocolforestimatingtransgenecopynumberinGMcitruswasconstructed.Theresultsshowedthatthelowcopynum

6、berofexogenousgeneintransgeniclinewasone，andthehighestcopynumberwasfive.One，twoand≥threecopiesdetectedaccountedfor40.0%，18.0%，42.0%，respectively，ofthetotal.TheexogenousgenecopyinthetransgeniclineswasfurtherconfirmedbySouthernblot，andthecopynumberwasconsistent收稿日期：2016–03–25；修回日期：2016–06–0

7、3基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31272150）；國(guó)家現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系建設(shè)專項(xiàng)資金項(xiàng)目（CARS-27）；國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2012BAD19B06）；重慶市基礎(chǔ)與前沿研究計(jì)劃項(xiàng)目（cstc2015jcyjA80042）；中央高校基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（XDJK2014C129）；中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)（XDJK2014A018）；重慶市集成示范重點(diǎn)項(xiàng)目（cstc2015jcsf-kjfp80027）*通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：zouxiuping@cric.cn；scc