益生菌和酸奶對乳糖不耐受作用及其機制研究

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1、四川大學(xué)博士學(xué)位論文益生菌和酸奶對乳糖不耐受作用及其機制研究姓名：鐘燕申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：營養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)指導(dǎo)教師：黃承鈺20030506益生菌和酸奶對乳糖不耐受作用及其機制研究一中文摘要本課題在國內(nèi)首次應(yīng)用穩(wěn)定同位素”C-lactose／ZH．glucsoe技術(shù)和熒光原位雜交分析結(jié)腸菌群技術(shù)，分析了乳糖酶缺乏者發(fā)生LI的胃腸代謝因素，然后通過人群干預(yù)試驗，深入研究了益生菌和酸奶對LI作用及其機制，為正確認識和合理利用益生菌和酸奶制品的促健作用，防治LI的發(fā)生和改善人群鈣營養(yǎng)狀況提供了科學(xué)依據(jù)，其研究方法和研究結(jié)果處于國內(nèi)外同領(lǐng)域先進水平。全文從以下三

2、個方面進行研究：1．乳糖不耐受者胃腸代謝因素分析1．1乳糖不耐受者小腸黏膜乳糖酶活性和乳糖消化量研究小腸黏膜低乳糖酶活性是引起LI發(fā)生的主要原因，因此準(zhǔn)確分析酶活性是LI研究的基礎(chǔ)。目前最常用的方法是H2呼氣試驗或黏膜活檢法，但這兩種方法在可靠性或可行性方面存在明顯缺陷。本研究應(yīng)用穩(wěn)定同位素”C--lactose和2H—glucose，選用43名乳糖酶缺乏者(呼氣H2濃度>20ppm)作為實驗對象，給予受試者259”C--lactose和0．592H--glucose后，通過計算乳糖消化指數(shù)(1actosedigestionindex．LDI)來反應(yīng)小腸黏

3、膜乳糖酶活性。結(jié)果顯示乳糖不耐受者小腸乳糖酶活性降低，但仍殘存酶活性，可以消化一定量的乳糖，該方法可以準(zhǔn)確、靈敏地定量分析小腸黏膜乳糖酶活性。1．2乳糖不耐受者胃腸動力學(xué)研究通過對乳糖吸收不良組、輕度(無腹瀉癥狀)和重度(有腹瀉癥狀)乳糖不耐受組的胃腸動力學(xué)指標(biāo)進行分析，結(jié)果顯示吸收不良組的乳糖消化指數(shù)、乳糖消化量、胃排空時間、口一結(jié)腸轉(zhuǎn)運時間均顯著高于不耐受組；乳糖消化指數(shù)與口一結(jié)腸轉(zhuǎn)運時間之間呈顯著性正相關(guān)：而輕度和重度不耐受組之間以上各項指標(biāo)無顯著性差異，提示胃和小腸因素是引起乳糖酶缺乏者是否出現(xiàn)癥狀的主要原因，而不是引起乳糖不耐受者出現(xiàn)不同嚴重程度

4、癥狀的主要原因。1．3乳糖不耐受者結(jié)腸菌群構(gòu)成分析益生苗和酸奶對乳糖不耐受作用及其機制研究一中文摘要采用熒光原位雜交技術(shù)(FISH)分析乳糖吸收不良者和乳糖不耐受者的結(jié)腸菌群，發(fā)現(xiàn)他們結(jié)腸內(nèi)雙歧桿菌數(shù)量很低；LI癥狀的差異與結(jié)腸菌群的數(shù)量構(gòu)成有關(guān)，癥狀評分與細菌總數(shù)之間呈負相關(guān)關(guān)系，與一組數(shù)量上占優(yōu)勢的coccoides—Eubacteriumrectale細菌組數(shù)量呈負相關(guān)。2．益生茵和酸奶對LI作用及其機制研究選取11名有明顯LI癥狀的個體作為實驗對象，給予益生菌(含Bifidobacteriumlongum)和酸奶(含Lactobacillusbul

5、garicus．S加eptoccusthermophilus，Bifidobacteriumanimalis)干預(yù)14天，乳糖負荷試驗結(jié)果顯示LI癥狀顯著減輕，小腸黏膜乳糖酶活性和乳糖吸收量無顯著性改變，口一結(jié)腸轉(zhuǎn)運時間無顯著性變化。結(jié)果提示益生菌和酸奶對LI癥狀有明顯改善作用，這主要不是胃和小腸因素所致，很可能是結(jié)腸代謝因素。3．益生菌和酸奶對LI作用的結(jié)腸機制研究3．1益生菌和酸奶對結(jié)腸菌群的影響分析受試者在接受干預(yù)措施之前、干預(yù)期間以及停止干預(yù)之后結(jié)腸內(nèi)的細菌總數(shù)和幾組主要細菌的數(shù)量改變，發(fā)現(xiàn)給予干預(yù)措施之后細菌總數(shù)和主要細菌組的數(shù)量均顯著升高；干預(yù)

6、停止后1周雙歧桿菌數(shù)量仍有所增加且顯著高于干預(yù)前的水平，而細菌總數(shù)和其他幾組細菌數(shù)量下降，高于干預(yù)前水平但沒有顯著性差異，說明益生菌和酸奶在干預(yù)期間可以引起結(jié)腸菌群的改變，而且這種作用在于預(yù)停止后可以持續(xù)一段時間，尤其以對雙歧桿菌的作用更為明顯。3．2益生菌和酸奶對結(jié)腸B一半乳糖苷酶活性的影響給予干預(yù)措施之后結(jié)腸B一半乳糖苷酶活性顯著升高，一方面說明來自益生菌和酸奶發(fā)酵菌的B一半乳糖苷酶能抵抗胃酸、消化酶和膽鹽等因素的破壞，在結(jié)腸內(nèi)仍然維持其活性；另一方面說明該酶活性的升高可能與結(jié)腸細菌數(shù)量的增加有關(guān)。益生菌和酸奶對乳糖不耐受作用及其機制研究一中文摘要3．

7、3外源性益生菌和酸奶發(fā)酵菌在結(jié)腸內(nèi)存活能力的研究采用雙歧桿菌特異性PCR和變性梯度凝膠電泳(DGGE)技術(shù)分析給予益生菌和酸奶干預(yù)前后LI實驗對象結(jié)腸雙歧桿菌菌種構(gòu)成的改變，結(jié)果顯示來自益生菌膠囊和酸奶的外源性雙歧桿菌在干預(yù)期問能夠在結(jié)腸內(nèi)存活，并影響內(nèi)源性雙歧桿菌和其他菌群的數(shù)量構(gòu)成，起到改善LI的作用，81．8％(9名)個體出現(xiàn)來自酸奶的Bifidobacteriumanimalis，干預(yù)結(jié)束后消失；36．4％(4名)個體出現(xiàn)來自Bifina膠囊的Bifidobacteriumlongum，干預(yù)結(jié)束后電泳條帶消失或變淺：如果Bifidobacteriu

8、mlongum干預(yù)前在結(jié)腸內(nèi)已經(jīng)存在，仍持續(xù)存在。計數(shù)結(jié)果顯示干預(yù)