牛病毒性腹瀉與粘膜病

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1、牛病毒性腹瀉與黏膜病牛病毒性腹瀉，又稱牛病毒性腹瀉/粘膜病，是由BVDV引起的，主要侵害牛、羊、鹿、牦牛等反芻動物及豬的一種重要傳染病。臨床主要表現(xiàn)為發(fā)熱、粘膜糜爛、潰瘍、白細胞減少、持續(xù)感染、咳嗽及懷孕母牛流產(chǎn)或產(chǎn)生畸形胎兒。同一種病原引起的多種病狀的傳染病我國1980年李佑民首從國外進口奶牛分離出BVDV；上世紀90年代鄭志剛等在全國范圍內(nèi)調(diào)查，BVDV平均陽性率為19.56%，近年來本病在國內(nèi)陽性檢出率呈逐年上漲的趨勢。本病給養(yǎng)牛業(yè)造成明顯損失（產(chǎn)乳↓、重↓、流產(chǎn)等）。牛病毒性腹瀉1BVDV的流行病學2BVDV的病原學3BVDV的基因結(jié)構(gòu)及其蛋白4BVDV的研究進展內(nèi)容摘要56BVDV

2、的防治BVDV的主要診斷方法BVDV的流行病學傳染源：病牛和帶毒牛是主要傳染源。傳播途徑：主要通過消化道和呼吸道傳播；直接或間接接觸也可以傳播；吸血昆蟲也是重要的傳播媒介。易感動物：主要感染牛（肉牛、奶牛），也可感染豬。本病多發(fā)于寒冷季節(jié)，過分擁擠可促進本病發(fā)生。BVDV的病原學屬黃病毒科、瘟病毒屬有囊膜，直徑25-30nm，正鏈RNA胎牛腎、睪丸、豬腎、胎羊睪丸可增殖傳代BVDV。BVDV可以分成致細胞病變型（CP）和非致細胞病變型（NCP）。BVDV的基因結(jié)構(gòu)及其蛋白5'-Npro（P20）-C(P14)-Erns(gp48)-E1(gp25)-E2(gp53)-P7-NS2-3(P12

3、5)-NS4A(P10)-NS4B(P30)-NS5A(P58)-NS5B(P75)-3',其中C，ERNS，E1，E2是病毒的結(jié)構(gòu)蛋白。其余為非結(jié)構(gòu)蛋白。BVDV的主要基因、蛋白研究進展ADDYOURTITLE核衣殼組成成分，具有免疫原性BVDV基因組具有較高的保守性瘟病毒屬內(nèi)高度保守，在病毒復制、病毒RNA轉(zhuǎn)譯或者病毒多聚蛋白加工過程中具有重要作用5‘-UTRCNS3ERNS內(nèi)有一高度保守結(jié)構(gòu)域，可用于研究亞單位疫苗，也可作為基因工程診斷抗原E2與抗BVDV抗體結(jié)合、介導免疫中和反應及與宿主細胞識別、吸附的主要部位Npro具有自體蛋白酶活性，有較高的保守，可以對瘟病毒進行種、群或型的鑒定

4、5'-UTR：5'末端無甲基化的“帽子”結(jié)構(gòu)，5'-UTR序列在BVDV的各毒株間有較高的保守性，因此常根據(jù)5'-UTR的序列設(shè)計引物來檢測BVDV或?qū)VDV進行分型。5'-UTR在病毒轉(zhuǎn)錄、翻譯過程中起重要的作用。2010年張興娟等分別用5'-UTR設(shè)計一對引物，預擴增片段125bp；2010年孟雨等人也利用5'-UTR設(shè)計一對引物，預擴增片段218bp，實驗證明利用5'-UTR設(shè)計引物具有很好的特異性和敏感性。E2：是BVDV的主要保護性抗原，能誘導機體產(chǎn)生中和抗體，所以新型疫苗都是針對E2結(jié)構(gòu)蛋白的。也是與抗BVDV抗體結(jié)合、介導免疫中和反應及與宿主細胞識別、吸附的主要部位，E2基因

5、一直是國內(nèi)外學者研究瘟病毒的重點。E2是形成BVD基因工程疫苗的最好的選擇。BVDVE2DNA疫苗是近年來BVDV免疫研究的熱點。如2007吳明福等構(gòu)建真核表達質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-E2并免疫小鼠，可誘導小鼠產(chǎn)生一定程度的體液和細胞免疫應答。NS-3：NS3區(qū)域與病毒的毒力，生長特性有關(guān)。NS3在瘟病毒屬內(nèi)高度保守，在病毒復制、病毒RNA轉(zhuǎn)譯或者病毒多聚蛋白加工過程中具有重要作用。NS3的表達與宿主細胞CPE的產(chǎn)生有密切關(guān)系。2009年魏偉等用BVDVNS3蛋白中有免疫反應性的重組片段作為包被抗原，建立了一個BVDV抗體檢測的間接ELISA方法。血清學診斷免疫學診斷診斷方法的進展分子生

6、物學診斷123血清學診斷常見的方法為主要包括血清中和試驗和瓊脂擴散試驗兩種。瓊脂擴散試驗準確性較低，檢出的結(jié)果常常有假陽性。血清中和試驗重復性高，準確性好，已作為BVDV診斷的“金標準”，但血清中和試驗在基層使用時，常遇到費時、費力，需要細胞培養(yǎng)等試驗室技術(shù)問題，無法得到推廣。免疫學診斷酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）免疫熒光技術(shù)（IFA）免疫過氧化物酶技術(shù)（IP）免疫熒光技術(shù)（IFA）免疫熒光技術(shù)（IFA）又稱熒光抗體技術(shù)，可用于檢測細胞培養(yǎng)物以及病變組織的冰凍切片中BVDV感染情況。免疫熒光抗體技術(shù)特異、敏感、快速，但它需要熒光顯微鏡，使得此技術(shù)無法得到推廣應用。ELISAELISA常被用

7、于檢測組織器官培養(yǎng)物中BVDV，監(jiān)測牛群中BVD抗體水平，評估潛伏感染情況。其中最常用的是雙抗夾心ELISA和間接ELISA，也有使用BVDV單克隆抗體與ELISA聯(lián)合診斷BVD。研究較多的IBRV診斷蛋白有NS3，E2蛋白酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）免疫過氧化物酶技術(shù)（IP）診斷BVDV準確、可靠，可用于了解BVD的總體分布情況。鏈酶親和素-生物素過氧化物酶檢測方法，可以用來檢測福爾馬林固定、石蠟包埋組織