酸性α-淀粉酶產(chǎn)生菌的篩選

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1、—３６０—江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)２０１３年第４１卷第１２期郭宏文，郭建華，鄒東恢，等．酸性α－淀粉酶產(chǎn)生菌的篩選［Ｊ］．江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，２０１３，４１（１２）：３６０－３６２．酸性α－淀粉酶產(chǎn)生菌的篩選郭宏文，郭建華，鄒東恢（齊齊哈爾大學(xué)食品與生物工程學(xué)院／黑龍江省普通高校齊齊哈爾大學(xué)農(nóng)產(chǎn)品加工重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江齊齊哈爾１６１００６）摘要：從北大倉(cāng)酒廠白酒酒醅分離篩選到１株產(chǎn)酸性α－淀粉酶的菌株Ｃ６，采用液體發(fā)酵，３６℃、１８０ｒ／ｍｉｎ振蕩培養(yǎng)４８ｈ后產(chǎn)酶活力達(dá)到３８８．５Ｕ／ｍＬ。初步研究了酶性質(zhì)：Ｃ６產(chǎn)生的α－淀粉酶最適反

2、應(yīng)ｐＨ值為４．８，最適反應(yīng)溫度為６０℃，是一種中溫酸性α－淀粉酶，該酶在ｐＨ值３．５～９．０、溫度５０℃以下能較穩(wěn)定地存在。關(guān)鍵詞：酸性α－淀粉酶；篩選；酶性質(zhì)中圖分類號(hào)：Ｑ９３－３３１文獻(xiàn)標(biāo)志碼：Ａ文章編號(hào)：１００２－１３０２（２０１３）１２－０３６０－０２α－淀粉酶作用淀粉時(shí)可從分子內(nèi)部切開(kāi)α－１，４糖苷子培養(yǎng)基：含可溶性淀粉１．２％、蛋白胨０．８％、酵母粉鍵，最終產(chǎn)物為糊精、寡糖、麥芽糖和葡萄糖，是國(guó)內(nèi)外最常用０．２％、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０５％、ＫＨ２ＰＯ４０．１％，ｐＨ值７．０。的一種酶制劑。我國(guó)工業(yè)生

3、產(chǎn)中常用的中溫和高溫α－淀粉（５）發(fā)酵培養(yǎng)基：含可溶性淀粉１．５％、蛋白胨１．０％、酵母粉酶，其適用ｐＨ值范圍為６～７，在酸性條件下使用酶活性明顯０暢５％、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０５％、ＫＨ２ＰＯ４０．１％，ｐＨ值７．０。降低，不能滿足一些酸性條件下淀粉原料的深加工工藝要求。１．３主要試劑耐酸性α－淀粉酶是在酸性條件下能水解淀粉的酶類，可以試驗(yàn)用試劑均為分析純。在低ｐＨ值條件下液化淀粉，保持高活性。耐酸性α－淀粉酶１．４方法顯著的耐酸性使其具有很大的應(yīng)用潛力和開(kāi)發(fā)前景，可以廣１．４．１菌種分離初篩將白酒酒醅１０ｇ用

4、１５０ｍＬ無(wú)菌生泛應(yīng)用于食品、發(fā)酵、紡織、飼料、醫(yī)藥等多種領(lǐng)域，可以明顯理鹽水浸泡１ｈ，搖勻后吸取１．０ｍＬ于裝有５０ｍＬ富集培養(yǎng)地提高收得率，降低消耗，特別是能節(jié)約工業(yè)用糧，開(kāi)發(fā)耐酸基的三角瓶中，３６℃振蕩培養(yǎng)１８ｈ，取培養(yǎng)液涂布分離培養(yǎng)［１］性α－淀粉酶具有很大的經(jīng)濟(jì)、社會(huì)效益。自１９６３年日本基平板，３６℃培養(yǎng)４８ｈ，用碘液顯色，挑選菌落周?chē)型该魅Γ郏玻輰W(xué)者Ｍｉｎｏｄａ等首次發(fā)現(xiàn)黑曲霉可以產(chǎn)耐酸性α－淀粉酶且菌落直徑比較大的菌株接到斜面上，對(duì)菌株進(jìn)行純化分離。以來(lái)，許多國(guó)家都相繼對(duì)其展開(kāi)了研究，在國(guó)外已有將酸

5、性淀１．４．２液態(tài)發(fā)酵將純化后的菌種接種到裝有３０ｍＬ種子粉酶制劑應(yīng)用于工業(yè)生產(chǎn)的報(bào)道。國(guó)內(nèi)開(kāi)展相關(guān)研究起步較培養(yǎng)基的三角瓶中，３６℃、１８０ｒ／ｍｉｎ培養(yǎng)１８ｈ，然后?。玻恚掏?，目前對(duì)耐酸性α－淀粉酶的研究主要集中在菌種選育和接入裝有３０ｍＬ發(fā)酵培養(yǎng)基的２５０ｍＬ三角瓶中，３６℃、［３－６］構(gòu)建基因工程菌等方面。本實(shí)驗(yàn)室從分離篩選菌種的工１８０ｒ／ｍｉｎ培養(yǎng)４８ｈ。發(fā)酵液經(jīng)４層紗布過(guò)濾并離心取上清作入手，自白酒酒醅中篩選到１株產(chǎn)酸性α－淀粉酶的菌株液測(cè)定酶活性。Ｃ６，研究了其酶性質(zhì)，并對(duì)菌種特征進(jìn)行了初步鑒定。［７

6、－８］１．４．３酶活測(cè)定參見(jiàn)Ｙｏｏ改良法。1材料與方法１．４．４菌株特征鑒定通過(guò)顯微鏡觀察和生理生化試驗(yàn)進(jìn)［９］行鑒定。１．１菌種１．４．５粗酶液的制備將發(fā)酵液８０００ｒ／ｍｉｎ離心，取上清自北大倉(cāng)酒廠的白酒酒醅中分離篩選到的產(chǎn)酸性α－淀液先用３０％飽和度硫酸銨鹽析，離心后取上清液再用６０％飽粉酶的菌株Ｃ６。和度硫酸銨進(jìn)行二次鹽析，離心收集沉淀，用少量的ｐＨ值１．２培養(yǎng)基７暢０（０．１ｍｏＬ／Ｌ）的磷酸緩沖液溶解，經(jīng)透析后得到粗酶液，（１）分離培養(yǎng)基：含可溶性淀粉１％、蛋白胨０．５％、進(jìn)行酶性質(zhì)研究。Ｎａ２ＨＰＯ４０

7、．０１％、ＫＨ２ＰＯ４０．０１５％、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０５％、ＮａＣｌ０．１％、瓊脂１．８％，ｐＨ值４．０～４．５。（２）富集培養(yǎng)基：2結(jié)果與分析含可溶性淀粉１．２％、蛋白胨０．８％、酵母粉０．２％、ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０５％、ＫＨ２ＰＯ４０．１％，ｐＨ值５．０。（３）斜面培養(yǎng)基：含２．１菌種篩選可溶性淀粉１．２％、蛋白胨０．８％、酵母粉０．２％、ＭｇＳＯ４·進(jìn)行分離初篩，從大量菌株中選出了１００株透明圈與菌７Ｈ２Ｏ０．０５％、ＫＨ２ＰＯ４０．１％、瓊脂１暢８％，ｐＨ值７．０。（４）種落直徑比大的菌株進(jìn)行搖

8、瓶發(fā)酵（圖１），得到了１株產(chǎn)酸性α－淀粉酶活性相對(duì)較高且穩(wěn)定的菌株Ｃ６，酶活性為３８８．５Ｕ／ｍＬ。表１列出了透明圈與菌落直徑比值排在前１０收稿日期：２０１３－０５－１４位的菌株的酶活性情況?；痦?xiàng)目：齊齊哈爾大學(xué)青年教師科學(xué)技術(shù)類科研啟動(dòng)支持計(jì)劃（編號(hào)：２０１１Ｋ－Ｍ３５）。２．２菌株特征鑒定作者簡(jiǎn)介：郭宏文（１９７３—），男，河北深縣人，碩