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1、淀粉酶產(chǎn)生菌的分離第四小組淀粉酶：是指一類能催化分解淀粉分子中糖苷鍵的酶的總稱，主要包括α－淀粉酶和β-淀粉酶等，α-淀粉酶可從淀粉分子內(nèi)部切斷淀粉的α-1,4糖苷鍵，形成麥芽糖、含有6個葡萄糖單位的寡糖和帶有支鏈的寡糖，是淀粉的粘度下降，因此又稱為液化型淀粉酶。淀粉遇碘呈藍色。這種淀粉-碘復合物在660nm處有較大的吸收峰，可用分光光度計測定。隨著酶的不斷分作用，淀粉長鏈被切斷，生成小分子的糊精，使其對碘的藍色反應逐漸消失，因此可以根據(jù)一定時間內(nèi)藍色消失的程度為指標來測定α-淀粉酶的活力。實驗原理：土壤中含有大量的微生物，將土壤稀釋液涂在不同類型的培養(yǎng)基上，在適宜
2、的環(huán)境中培養(yǎng)幾天，細菌或者是其他的微生物便能在平板上生長繁殖，形成菌落。將初次篩選得到的微生物接到淀粉培養(yǎng)基上培養(yǎng)，因為只有能夠產(chǎn)生淀粉酶的細菌才能夠利用培養(yǎng)基中的淀粉成分來完成自身的生命活動，才能夠生存。故在淀粉培養(yǎng)基上長出的菌便是淀粉產(chǎn)生菌。在培養(yǎng)基上滴碘液，淀粉被分解掉的部分不顯現(xiàn)藍色，出現(xiàn)透明圈，可以通過透明圈的大小來初步判斷菌 種產(chǎn)淀粉的能力。實驗器材料及試劑：材料：河南科技學院花園土壤。 培養(yǎng)基： （1）分離培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基（牛肉膏3g、蛋白胨10g、NaCl?5g、溶于1000mL蒸餾水中，再加入15g瓊脂粉，pH調(diào)至7.2，121℃滅菌
3、15min，待冷卻至50℃左右時，于超凈工作臺倒平板）? （2）篩選培養(yǎng)基：淀粉培養(yǎng)基（可溶性淀粉20g,硝酸鉀1g,磷酸氫二鉀0.5g,氯化鈉0.5g,硫酸鎂0.5g,硫酸亞鐵0.01g,瓊脂20g,水1000毫升，調(diào)整pH值到7.2～7.4。）?（3）搖瓶培養(yǎng)：淀粉培養(yǎng)液。試劑：碘液、2%可溶性淀粉、pH6.0磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、標準糊精溶液、0.5mol/L乙酸、0.85%生理鹽水。4、器材：?培養(yǎng)皿、錐形瓶、高壓滅菌鍋、超凈工作臺、恒溫水浴鍋、分光光度計。器材：培養(yǎng)皿、錐形瓶、高壓滅菌鍋、超凈工作臺、恒溫水浴鍋、分光光度計。實驗步驟：淀粉產(chǎn)生菌的篩選：
4、? （1）采集土樣，并用無菌水稀釋成菌懸液；? （2）配置牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基及淀粉培養(yǎng)基，倒平板備用；? （3）將制好的菌懸液與超凈工作臺上涂到牛肉膏蛋白胨平板上，于37攝氏度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一天；? （4）挑取整個菌落，將其移入淀粉培養(yǎng)基中，繼續(xù)放在37攝氏度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)兩天；? （5）將碘液滴在平板上，觀察透明圈的大小。酶活力測定：（1）選產(chǎn)生透明圈最大的菌株進行搖瓶培養(yǎng)，將菌溶于5ml無菌生理鹽水中，吸取此培養(yǎng)液加入淀粉培養(yǎng)液中，30攝氏度搖瓶培養(yǎng)72h。? （2）酶液稀釋：?取發(fā)酵液進行4000r/min離心5min，取上清液，用緩沖液適當稀釋。 （3）標準
5、曲線制作：?準備七支試管，按照下表配置混合液。使用分光光度計策規(guī)定各管溶液在660nm下的OD值。然后以淀粉濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標，做標準曲線。管號1234567淀粉稀釋液/ml2(0%)2(0.2%)2(0.5%)2(1.0%)2(1.5%)2(2.0%)2(2.0%)緩沖液/ml111111140攝氏度水浴保溫5min蒸餾水/ml1111110粗酶液/ml000000140攝氏度水浴保溫30min，然后放入沸水浴5min稀碘液/ml1111111（4）酶活力測定取稀釋的粗酶液也按照下表中七號管的要求配置混合液，測得吸光度后，在標準曲線上查出相應的淀粉濃度，
6、求出被酶消耗的淀粉量。 （5）酶活力測定：?酶活力以每毫升粗酶液在40攝氏度，pH6.0的條件下每小時所分解的淀粉毫克數(shù)來衡量。淀粉產(chǎn)生菌的篩選：
