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1、第34卷分析化學(xué)(FENXIHUAXUE)研究報(bào)告第3期2006年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry298~302動(dòng)物肌肉組織中菌類同化激素多組分殘留的液相色譜一質(zhì)譜檢測(cè)方法秦燕陳捷’張美金(廣州出人境檢驗(yàn)檢疫局食品實(shí)驗(yàn)室，廣州510623摘要建立了不同動(dòng)物肌肉中街類同化激素(表辜酮、丙酸辜酮,19一去甲基皋酮、甲基皋酮、孕酮、甲經(jīng)孕酮、雌二醉、雌三醉、炔雌醉、雌酮)多殘留量的LC/MS/MS確證方法。樣品加醋酸緩沖溶液均質(zhì)，加酶溶液酶解后，再加甲醉超聲提取，用叔丁基甲醚液一液萃取至少2次
2、，之后經(jīng)反相固相萃取柱凈化，以乙睛一水為流動(dòng)相，經(jīng)C,。柱分離后進(jìn)行LC/MS/MS多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下的定性及定量分析。其中雄激素，孕激素采用正離子掃描，雌激素則采用負(fù)離子掃描。176eta-NT,MTS,ETS,MED,PG,PTS,EST,17beta-ES,EES和ESN的定量檢出限為0.5一1.0jig/噸。在1.0wg/kg的定量檢出限添加水平，上述10種激素的平均回收率為55%-77%;相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為7.1%一35%。可實(shí)現(xiàn)樣本靈敏、準(zhǔn)確的定性定量分析。關(guān)扭詞19類同化激素，多殘留分析，反相固相萃取，液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用
3、1引言激素(hormone)是生物體內(nèi)產(chǎn)生的一類調(diào)節(jié)機(jī)體代謝或生理功能的微量物質(zhì)。濫用同化激素，對(duì)人和動(dòng)物健康，對(duì)社會(huì)和生態(tài)環(huán)境都會(huì)造成直接或潛在的危害。上世紀(jì)80年代以來(lái)，許多國(guó)家或組織通過(guò)立法限制或禁止在食用性動(dòng)物飼養(yǎng)中使用同化激素。國(guó)外有關(guān)尿、血、組織中幽類同化激素(anabolicsteroids,ASs)殘留檢測(cè)的文獻(xiàn)報(bào)道較多〔1,21，主要有氣/質(zhì)聯(lián)用法[[3,41、液/質(zhì)聯(lián)用法[[5,61、高效液相色譜法〔，一，〕等。我國(guó)于90年代起禁止將ASs用于促生長(zhǎng)目的，并開(kāi)始相關(guān)的監(jiān)測(cè)工作。但目前尚沒(méi)有成熟的針對(duì)動(dòng)物源性食
4、品中其殘留檢測(cè)的確證方法。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)ASs多殘留測(cè)定的研究，建立了不同動(dòng)物肌肉中幽類同化激素多殘留的LC/MS/MS測(cè)定方法。2實(shí)驗(yàn)部分2.1儀器與試劑IKAT18勻質(zhì)器(美國(guó)UltraTurrax公司);Yamato8210型水浴超聲波發(fā)生裝置(Branson公司);5810型離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(德國(guó)Heidolph公司);氮?dú)鉂饪s儀(美國(guó)Zymark公司);Milli-Q去離子水發(fā)生器(美國(guó)Millipore公司);12通道半自動(dòng)固相萃取裝置(美國(guó)Supelco公司)。液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用儀(美
5、國(guó)API公司);Agilent1100液相色譜系統(tǒng)(美國(guó)Agilent公司)，含G1313A四元泵、G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器和G1316A柱溫箱;API3000三級(jí)四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜(采用TurbosprayESI電離源)。標(biāo)準(zhǔn)品見(jiàn)表1。除ETS購(gòu)自Sigma-Aldrich公司外，其余標(biāo)準(zhǔn)品均來(lái)自Riedel-deaen公司。配制混合激素的甲醇貯備溶液100mg/L，置于一18℃避光存放。吸取貯備溶液1.0mL，用甲醇定容至100ml,得到1.0mg/L的工作溶液，繪制校準(zhǔn)曲線時(shí)用乙睛/水(VIV=50/50)逐級(jí)稀釋工作溶液。甲醇
6、、叔丁基甲醚、乙睛和甲苯，均為HPLC級(jí)(Merck公司);月一葡糖昔酸酶/芳基硫酸醋酶水溶液(EC3.2.1.31+EC3.1.6.1，Helixpomatia,MerckNo.4114)，WatersT"'Sep-Pak⑧Cia(500mg/3ml,)固相萃取柱;醋酸緩沖溶液(0.04moVL,pH5.0):稱取43.0gNaAc·3H20用水溶解，加人25.2g冰乙酸用水定容至1000mLo2.2樣品前處理2.2.1制樣稱取剔除骨、皮的動(dòng)物肌肉組織樣本100-200g，用家庭用攪拌器制樣后，于一18℃密封2005-05-1
7、4收稿;2005-08-19接受本課題為國(guó)家科技部“十五”科技攻關(guān)項(xiàng)目(No.2001BA804A11)基金資助第3期秦燕等:動(dòng)物肌肉組織中幽類同化激素多組分殘留的液相色譜一質(zhì)譜檢測(cè)方法保存。表1同化激素標(biāo)準(zhǔn)品Table1Thestandardcompoundofanabolichormones2.2.2勻質(zhì)和酶解稱取5.0g試同化激素純度(%)樣(精確至0.1g)至50mL離心管AnabolichormonesPurity中，加人10ML醋酸緩沖溶液，用勻質(zhì)表架酮Epitestosterone,EST481-30-1C,9H2
8、S02>99.09O9O丙酸串酮Testosterone17-propionate,PTS57-85-2C22H3203器于10000r/min勻質(zhì)2x2Os后，加卯R19一去甲基攀酮Androlone,170-NT434-22-0C22H3203︸人100泌酶
