資源描述：
《山楂核中熊果酸含量的HPLC測定》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、上海中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報第15卷第1期VOL.15NO.12001年3月ACTAUNIVERSITATISTRADITIONISMEDICALISSINENSISPHARMACOLOGIAEQUESHANGHAIMar.,2001山楂核中熊果酸含量的HPLC測定楊曉彤程樂樂糜可周韻麗楊慶堯上海師范大學(xué)微生物與免疫學(xué)研究所(上海200024)摘要:采用C18反相高效液相色譜RP-HPLC法對山楂核中的熊果酸作含量測定。結(jié)果:測得山楂核中的熊果酸含量為01577mg/g,回收率為103113%,保留時間和峰面積的變異系數(shù)分別為0118%和11
2、68%(n=8)。山楂核甲醇萃取液在作HPLC分析前,先用硅膠柱吸附,再用洗脫液(環(huán)己烷:乙酸乙酯:冰醋酸=12B4B1)洗脫,可去除大部分雜質(zhì),提高測定效果。關(guān)鍵詞:山楂核(SeedofCrataeguspinnatifida),熊果酸,RP-HPLC中圖分類號:R282.6文獻(xiàn)標(biāo)識碼:B文章編號:1008-861X(2001)01-0055-03熊果酸(Ursolicacid,UA)屬三萜類化合物,廣泛存在于層析液(環(huán)己烷:乙酸乙酯:冰醋酸=12B4B1)洗脫,收集洗脫[1]山楂、烏梅、夏枯草等植物。近年發(fā)現(xiàn)熊果酸除有抗炎、抗液
3、,減壓蒸干,用甲醇溶解并定容至1ml,0122mm膜過濾后進(jìn)突變活性外,對多種惡性腫瘤細(xì)胞亦有強(qiáng)烈的毒殺效行HPLC分析。[2~4][5]應(yīng),并有誘導(dǎo)癌細(xì)胞分化的能力。已知山楂中含熊果2.1.3樣品測定結(jié)果山楂核提取樣品經(jīng)硅膠柱預(yù)處理后[6][7]酸。有人在山楂核中也檢測到熊果酸,但迄今未見其含上HPLC儀測定,測定用流動相為甲醇/水(用甲酸調(diào)pH至量報道。本文用HPLC測定了山楂核中的熊果酸含量。3)=95/5(V/V);流速:1ml/min;進(jìn)樣量:20Ll;在215nm波長下檢測,用熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品作對照。結(jié)果:樣品在熊果酸標(biāo)準(zhǔn)1
4、儀器與材料品的出峰位置上出現(xiàn)相同的色譜峰(圖1)。另在樣品中加儀器:BeckmanGoldSystem高效液相色譜儀及軟件,125入熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品后該峰的面積增加,但保留時間未改變,且型泵,168型紫外二極管陣列檢測器;BeckmanUltrasphereC18沒有出現(xiàn)新增的峰(圖2)。反相柱(416@250mm,加416@50mm保護(hù)柱);旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器為Bchi公司產(chǎn)品;CQ250超聲波發(fā)生器產(chǎn)自上海超聲儀器廠。材料:熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品由中國藥品生物制品檢定所提供。山楂購自天津市場,品種名:大紅袍。測定用甲醇為色譜級。提取用試劑(甲醇、環(huán)己
5、烷、乙酸乙酯、冰醋酸)均為化學(xué)純。層析硅膠為上海五四化學(xué)試劑廠產(chǎn)品。2方法與結(jié)果2.1山楂核樣品制備、預(yù)處理及熊果酸檢出2.1.1樣品提取:將鮮山楂沸水煮1min后,分離山楂核,a:山楂核甲醇提取物b:熊果酸60~80e烘干,打成200目的細(xì)粉,精密稱取山楂核粉1g,加MethanolextractoftheUrsolicacid(uA)100ml甲醇,90e水浴回流提取6h或置超聲波發(fā)生器內(nèi)超聲SeedsofC.pinnatifida提取1h,過濾,取濾液減壓蒸干,殘渣用甲醇溶解并定容至圖1山楂核甲醇提取物與熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品HPLC色
6、譜圖5ml,待作硅膠柱預(yù)處理。Fig.1HPLCchromatogramsofmethanolextractoftheseedsof2.1.2硅膠柱預(yù)處理:取100g層析用硅膠,用二倍柱體C.pinnatifida除上述色譜圖外,另以每秒4次的頻率記錄190~320nm積的洗脫液(環(huán)己烷:乙酸乙酯:冰醋酸=12B4B1,V/V)洗脫,范圍內(nèi)的光譜吸收,結(jié)果兩者的光譜吸收圖完全一致,其最100e烘至無酸味。取118g裝成id8@85mm的硅膠柱。精大吸收在204nm(圖3a)。將上述光譜進(jìn)一步作二階導(dǎo)數(shù)變密吸取015ml待處理樣品于硅
7、膠柱上,待甲醇揮干后用7ml換,其二階導(dǎo)數(shù)光譜也完全一致(圖3b)。由此可見兩者為同一物質(zhì),山楂核提取物中的該色譜峰為熊果酸吸收峰。基金項目:上海市高等學(xué)?？茖W(xué)技術(shù)發(fā)展基金資助項目(96011)54實驗研究2.2山楂核中熊果酸含量的HPLC測定2.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線制作精密稱取干燥至恒重的熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品9171mg,甲醇溶解成濃度為01971mg/ml的標(biāo)準(zhǔn)溶液。精密吸取該溶液,加甲醇配制成濃度分別為01194,01097,01049,01024,01012(mg/ml)的溶液進(jìn)行HPLC測定,并計算回歸方程。結(jié)果熊果酸峰面積(P.A.)
8、與熊果酸濃度(Conc.)關(guān)系為:P.A.=12411465Conc.)01305649(r=019998)。2.2.2精密度測定取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液(濃度為01194a:未加熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品b:已加熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品2mg/ml)連續(xù)進(jìn)樣8次,結(jié)
