spehplc法測(cè)定苦丁茶老葉中熊果酸的含量

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1、SPEHPLC法測(cè)定苦丁茶老葉中熊果酸的含量：路玫，李徽，蒙大平，榮延平【摘要】目的建立苦丁茶老葉中熊果酸含量的測(cè)定方法。方法采用SPEHPLC法，以1mLOASISRHLBCartridge固相萃取小柱對(duì)樣品進(jìn)行提取分離；色譜柱為NovaPakC18柱(3.9mm×150mm，4μm)；以甲醇水磷酸（體積比85∶15∶0.1）為流動(dòng)相，流速為0.8mL·min－1，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，柱溫：30℃。結(jié)果測(cè)定組分熊果酸與其他組分的色譜峰達(dá)到基線分離；熊果酸平均加樣回收率為98.25%，RSD＝0.64%。結(jié)論本方法可有

2、效減少雜質(zhì)干擾，結(jié)果準(zhǔn)確可靠,并且有利于色譜柱的保護(hù)?！娟P(guān)鍵詞】苦丁茶；SPEHPLC法；熊果酸；含量測(cè)定　　Abstract:ObjectiveToestablishamethodfordetectingthecontentofursolicacidintheoldleavesofIlexKudingchabySPEHPLC.MethodsUrsolicacidextractedfromtheleavesm×150mm，4μm）columnusingmethanolH2Ophosphate(85∶15∶0.1)asmob

3、ilephase.ThefloL·min-1anddetection.ResultsUrsolicacidcouldbeseparatedethodissimpleandaccurate.　　KeyLOASISRHLBCartridge固相萃取小柱（m×150mm,4.0μm)；流動(dòng)相為甲醇水磷酸（體積比85∶15∶0.1）；檢測(cè)波長(zhǎng)：220nm；流速：0.8mL·min-1；柱溫：30℃。在此色譜條件下，熊果酸的保留時(shí)間約為13min。　　2.2系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)分別取熊果酸對(duì)照品溶液及樣品溶液，在上述色譜條件下各進(jìn)樣10μL,

4、結(jié)果，樣品溶液與對(duì)照品溶液在相同的保留時(shí)間有相似的色譜峰，而且熊果酸與其他成分能夠較好地分離,按熊果酸計(jì)算理論塔板數(shù)不低于3000，拖尾因子1.02,分離度大于1.5,保留時(shí)間約為13min，結(jié)果見(jiàn)圖1?！　?.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備精密稱取熊果酸對(duì)照品8.34mg，置10mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，得濃度為0.834mg·ml-1的對(duì)照品溶液。分別取該對(duì)照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、4.0mLA.熊果酸對(duì)照品；B.苦丁茶樣品　　圖1高效液相色譜圖　略　　置10mL容量瓶中，以甲醇定容至刻度，搖勻，按上述色譜條

5、件，分別進(jìn)樣10μL，以熊果酸的進(jìn)樣量(m)為橫坐標(biāo)，峰面積(A)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果回歸方程為：A＝220215m-7590.60(r＝0.9999)，表明熊果酸的進(jìn)樣量在0.417-3.336μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系?！　?.4精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取熊果酸對(duì)照品溶液10μL，在上述色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，結(jié)果其峰面積的RSD＝1.34％（n＝5）。精密吸取新配制的樣品溶液10μL，每隔1h進(jìn)樣測(cè)定1次，連續(xù)測(cè)定5次，結(jié)果測(cè)得峰面積的RSD＝1.82％（n＝5），說(shuō)明樣品溶液在5h內(nèi)穩(wěn)定性良好?！?/p>

6、　2.5重復(fù)性試驗(yàn)對(duì)同一批樣品（批號(hào)：041015），分別取5份，每份約10g，按“2.7”項(xiàng)下操作，結(jié)果測(cè)得樣品中熊果酸的平均含量為160.82μg·g-1，RSD＝1.28%（n＝5），表明本方法的重復(fù)性良好?！　?.6回收率試驗(yàn)取已測(cè)知含量的樣品(批號(hào)041015)5份，每份約10g，分別精密加入0.834mg·mL-1的對(duì)照品溶液2.0mL，按“2.7”項(xiàng)下操作，在上述色譜條件下進(jìn)樣10μL，按樣品含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算平均回收率，結(jié)果見(jiàn)表1?！　”?樣品中熊果酸含量測(cè)定結(jié)果　略　　3討論　　3.1文獻(xiàn)報(bào)道苦丁茶老葉所含槲

7、皮素含量低于成品茶或嫩葉，而山萘素含量卻是老葉高于嫩葉［2］。筆者試驗(yàn)測(cè)得苦丁茶老葉中熊果酸的含量約為嫩葉中的2倍(另文發(fā)表),這些提示了如選用老葉作為從苦丁茶中提取熊果酸的原料，產(chǎn)率將比嫩葉高，苦丁茶老葉仍不失其藥用價(jià)值?！　?.2不同部位的苦丁茶葉中熊果酸的含量存在著一定差異。本文采用固相萃取高效液相色譜法測(cè)定苦丁茶老葉中熊果酸的含量,所建立的方法能較好地消除雜質(zhì)的干擾，結(jié)果準(zhǔn)確度較高?！　?.3由于熊果酸不溶于水，在洗脫液甲醇比例研究中,發(fā)現(xiàn)10%～35%（體積分?jǐn)?shù)）的甲醇無(wú)法將熊果酸洗脫下來(lái),而80%（體積分?jǐn)?shù)）甲醇可以

8、將熊果酸完全洗脫,且用量少,所以采用80%（體積分?jǐn)?shù)）甲醇進(jìn)行洗脫收集?！　?.4本法簡(jiǎn)便、靈敏、準(zhǔn)確性、重復(fù)性良好,可作為苦丁茶老葉中熊果酸含量測(cè)定的方法?！?/p>