甘草中總黃酮的提取與含量測定

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1、甘草中總黃酮的提取及含量測定前言甘草是我國傳統(tǒng)常用中草藥之一，也是我國重要的植物資源?。甘草黃酮類成分是甘草中最重要的活性成分之一，具有抗氧化、抗腫瘤、增強(qiáng)一t5血管功能、增強(qiáng)免疫力等作用。因此，開展甘草的深加工，使甘草資源得以充分利用，增加資源的附加值，前景十分可觀。為此，筆者以甘草為對象，研究了甘草黃酮的乙醇回流提取工藝，單因素試驗(yàn)確定各因素對提取工藝的影響，正交試驗(yàn)確定甘草黃酮提取的最佳工藝條件。1材料與方法1.1材料甘草，市售；試劑：亞硝酸鈉、碳酸鈉、石油醚、蒸餾水、氫氧化鈉、鹽酸、無水乙醇、蘆?。粌x器：燒杯、容量瓶

2、、移液管、玻璃棒、量筒、回流裝置、濾紙、HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋、分析天平、AB104．N電子天平、布氏漏斗、SHZ—C型循環(huán)水多用真空泵、分光光度計(jì)。1.2方法1.2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制稱取蘆丁對照品10mg，用95%的乙醇溶解，搖勻，定容至10ml，使之成為濃度為1mg/ml的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作為貯備液備用。量取上述溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml，分別加水至3ml，加5%亞硝酸鈉溶液0.5ml，放置6min，加10%的硝酸鋁溶液0.5m1，搖勻、放置6min后加5%的氫氧化鈉溶液2.5m1，混勻、放置

3、15min后蒸餾水定容至10ml。用紫外分光光度計(jì)在500nm處測吸光度，以對照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。1.2.2材料處理取甘草根莖粉(粉碎過40-60目篩)3g置于燒杯中,按甘草粉末:乙醇(1:30)加入90ml濃度為70%的乙醇混合均勻.1.2.3試驗(yàn)設(shè)計(jì)（按每組自己做的時候用的方法的具體過程寫）第五組：1.配置蘆丁標(biāo)液：2.配置標(biāo)準(zhǔn)曲線所需不同濃度溶液3.測吸光度，以對照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。4.處理樣品5.測出樣品吸光度，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出樣品總黃酮含量1.2.4甘草黃酮含量測定

4、收集濾液并測量濾液體積，取樣按繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測定其吸光度值，根據(jù)公式計(jì)算每克甘草中黃酮的含量。（有稀釋的寫清稀釋了多少倍等）2結(jié)果與分析測出樣品吸光度為0.146.對比出標(biāo)準(zhǔn)曲線得出濃度為0.0213mg/ml此濃度為10ml樣品處理液的濃度。則3ml參比原液中物質(zhì)的量為0.0213mg/ml*0.01L=0.000213mg則參比原液的濃度為0.000213/0.003=0.071mg/ml則樣品原液的濃度為0.071*5=3.55mg/ml提取原液有20ml，則樣品中甘草黃酮含量為3.55*20/3=23.67mg/

5、g3結(jié)論經(jīng)過預(yù)試驗(yàn)確定影響提取含量的主要因素為乙醇濃度、時間、溫度、料液比。因此先進(jìn)行單因素試驗(yàn)，根據(jù)單因素試驗(yàn)的結(jié)果，以乙醇濃度、時間、溫度、料液比為因素、進(jìn)行(3)正交試驗(yàn)，根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果確定最佳工藝。根據(jù)其他幾組同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果做出如下分析乙醇濃度對提取含量的影響。由圖2可知，乙醇濃度的最優(yōu)水平為75％，而在兩側(cè)的濃度范圍內(nèi)提取含量都是隨之下降的。乙醇濃度越大，極性越小，增大極性小的黃酮類溶出，從而在一定乙醇濃度范圍內(nèi)，提取含量呈上升趨勢；當(dāng)乙醇濃度超過一定范圍，即極性過大，減少了黃酮糖苷類等的溶出，從而提取含量呈下降

6、趨勢。因而在設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)時，將其濃度選在75％左右。溫度對提取含量的影響。由圖3可知，當(dāng)溫度低于85℃時，隨著溫度的升高，從熱動力學(xué)方面增加了黃酮類的溶出，從而提取含量呈上升趨勢；當(dāng)溫度高于85℃時，可能黃酮類發(fā)生水解、裂解或者黃酮類之間發(fā)生了一系列反應(yīng)，從而使提取含量呈下降趨勢。因而在設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)時，溫度選擇在85℃左右。時間對提取含量的影響。由圖4可知，當(dāng)時間少于3h時，由于時間的增大有助于黃酮類的溶出，從而提取含量呈上升趨勢；當(dāng)時間超過3h時，提取含量反而略微降低。理論上講在3．5h提取含量應(yīng)趨于一個平衡值，或者比3h

7、稍有上升趨勢，然后再趨于一個平衡值。這可能是由于加熱時間過長，造成黃酮糖苷類的水解，導(dǎo)致黃酮檢出量減少，從而提取含量呈下降趨勢。因此，在正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)時，時間應(yīng)選擇在3h左右。料液比對提取含量的影響。由圖5可知，當(dāng)料液比小于1：30時，隨著料液比的增大提取含量呈上升趨勢；當(dāng)料液比高于1：30時，隨著料液比的增大反而呈下降趨勢。料液比影響溶劑的極性，從而影響了不同極性黃酮類的溶解性；同時能耗也隨著料液比的增大而增大，導(dǎo)致在后續(xù)試驗(yàn)萃取過程中萃取劑用量也隨之增加。因此在設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)時，將料液比選擇在1：30左右。根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果

8、，設(shè)計(jì)k(3)正交試驗(yàn)。試驗(yàn)結(jié)果見表1。由表1可以看出提取甘草黃酮的最優(yōu)方案為A。BCD，即料液比為1：20，度為85℃，提取時間為4h，乙醇濃度為75％。由極差分析可知，各因素主次順序?yàn)镈BAC，即乙醇濃度對甘草黃酮的提取含量影響最大，溫度對甘草黃酮提取含量影響次之，影響最小的因素是提取