8人類免疫缺陷病毒抗體測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

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1、第5頁共5頁滁州市第一人民醫(yī)院（南區(qū)）檢驗(yàn)科標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008版本：1滁州市第一人民醫(yī)院（南區(qū)）檢驗(yàn)科標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程項(xiàng)目人類免疫缺陷病毒抗體測(cè)定方法（雙抗原夾心法）文件編號(hào)CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008版本第1版編寫者：鄭昕審核者：陶良萍批準(zhǔn)者：謝瑞玉批準(zhǔn)日期：20161101本規(guī)程自2016年11月1日起實(shí)施，每3年復(fù)審一次復(fù)審人：復(fù)審日期：文件分發(fā)部門和/或個(gè)人：醫(yī)務(wù)科保管者院長(zhǎng)辦公室保管者院檔案室保管者檢驗(yàn)科主任臨床免疫室√規(guī)程修訂記錄：修訂號(hào)修訂內(nèi)容修訂人修訂日期第5頁共5頁滁州市第一人民醫(yī)院（南區(qū)

2、）檢驗(yàn)科標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008版本：11.原理采用雙抗原夾心兩步法檢測(cè)人血清或血漿中的HIV1/HIV2型抗體。在微孔板預(yù)包被基因重組HIV(1+2)型抗原，當(dāng)加入的待測(cè)樣本中存在HIV抗體時(shí)，將反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物，再與加入的酶標(biāo)記基因工程HIV(1+2)型抗原反應(yīng)，最后形成“固相HIV抗原-HIV抗體-酶標(biāo)記HIV抗原”的免疫復(fù)合物，加入底物后形成顯色反應(yīng)。2.樣品要求2.1病人準(zhǔn)備事項(xiàng)準(zhǔn)備事項(xiàng)具體內(nèi)容禁食/特種飲食不要求禁食，但由于重度脂血可能干擾檢測(cè)，禁食樣品最佳。病人的準(zhǔn)備事項(xiàng)安靜狀態(tài)下抽取靜脈血，樣品采集特殊

3、要求采血時(shí)應(yīng)一針見血，切忌反復(fù)穿刺，避免溶血2.2樣品類型及處理方法樣品類型血清或肝素、枸櫞酸鈉、EDTA抗凝血漿樣品量最佳量5ml最少量3ml收集容器肝素抗凝管（綠帽）運(yùn)輸要求室溫穩(wěn)定性及儲(chǔ)藏要求室溫2小時(shí)冷藏溫度（2-8?C）4天-20°C1月-70°C6月標(biāo)本制備4000轉(zhuǎn)/分離心5分鐘制備血清/血漿標(biāo)本拒收拒絕采集量不足、肉眼觀察有溶血及抗凝劑類型不符的樣品3.試劑名稱規(guī)格儲(chǔ)存條件有效期第5頁共5頁滁州市第一人民醫(yī)院（南區(qū)）檢驗(yàn)科標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008版本：1HIV預(yù)包被微孔板（包被基因工程HIV抗原）96人份2℃

4、～8℃避光保存12個(gè)月HIV酶標(biāo)抗原（含HRP標(biāo)記基因工程HIV抗原）1支2℃～8℃避光保存12個(gè)月HIV-1型陽性對(duì)照（含HIV-1型抗體）1支2℃～8℃避光保存12個(gè)月HIV-2型陽性對(duì)照（含HIV-2型抗體）1支2℃～8℃避光保存12個(gè)月HIV抗體陰性對(duì)照（正常人血清）1支2℃～8℃避光保存12個(gè)月濃縮洗滌液（PBS-T緩沖液）2瓶2℃～8℃避光保存12個(gè)月底物A(含H2O2)1支2℃～8℃避光保存12個(gè)月底物B（含TMB）1支2℃～8℃避光保存12個(gè)月終止液（含H2SO4）1支2℃～8℃避光保存12個(gè)月4.儀器名稱廠家型號(hào)全自動(dòng)酶標(biāo)分析儀北京天石SM-35.

5、方法性能5.1特異性：陰、陽性參考品檢出情況符合要求。5.2靈敏度：各亞型的最低檢出量符合要求。5.3精密性：檢測(cè)精密性參考品，CV≦15%（N=10）。5.4穩(wěn)定性：試劑盒內(nèi)各組分，37℃放置6天，產(chǎn)品性能仍符合1-3項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)。6.質(zhì)量控制6.1設(shè)置陰、陽對(duì)照6.2失控規(guī)則：陰性對(duì)照OD均值>0.1或者陽性對(duì)照OD均值≦0.6第5頁共5頁滁州市第一人民醫(yī)院（南區(qū)）檢驗(yàn)科標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008版本：17.操作步驟7.1平衡：將試劑盒各組分從盒中取出，平衡至室溫，微孔板開封后，余者即時(shí)以自封袋封存。7.2配液：濃縮洗滌液配制前

6、充分搖勻，濃縮洗滌液和蒸餾水或去離子水按1:19稀釋后使用。7.3編號(hào)：取所需數(shù)量微孔條固定于支架，按順序編號(hào)。7.4加樣：分別在相應(yīng)孔中加入50ul陰、陽性對(duì)照血清和待測(cè)樣本50ul。7.5溫育：封板后，置37℃溫育60分鐘。7.6洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌后扣干。7.7加酶：分別在每孔中加入酶標(biāo)記抗體100ul。7.8溫育：封板后，置37℃溫育30分鐘。7.7洗滌：用洗滌液充分洗滌5次，洗滌后扣干。7.8顯色：每孔加入底物A、B各50ul，混勻，置37℃溫育30分鐘。7.9終止：每孔加入終止液50ul，混勻。7.10測(cè)定：用酶標(biāo)儀雙波長(zhǎng)450nm/630n

7、m測(cè)定各孔OD值，并記錄結(jié)果。8.結(jié)果判定樣本OD值S/C.O.≧1者為HIV抗體反應(yīng)初篩陽性樣本OD值S/C.O.<1者為HIV抗體反應(yīng)陰性初篩陽性者應(yīng)重新取樣進(jìn)行雙孔復(fù)試，復(fù)試陽性者應(yīng)按照“全國(guó)HIV檢測(cè)管理規(guī)范”送HIV確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行相關(guān)確認(rèn)試驗(yàn)。9.危急值及處理無。10.臨床意義適用于HIV(1+2)型抗體的輔助診斷及獻(xiàn)血員篩查?？梢杂行У臏p少疾病的傳播擴(kuò)散。12.干擾溶血、高血脂、高膽紅素樣本有一定干擾。不能使用疊氮鈉防腐。第5頁共5頁滁州市第一人民醫(yī)院（南區(qū)）檢驗(yàn)科標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程文件編號(hào)：CZYY-NQ-JYK-SOP-MY-008版本：113.參考文