《核醫(yī)學(xué)分子核醫(yī)學(xué)》PPT課件

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1、分子核醫(yī)學(xué)進展定義：分子生物學(xué)與實驗核醫(yī)學(xué)結(jié)合…。內(nèi)涵：利用示蹤技術(shù)觀察體內(nèi)的生化過程并與相關(guān)基因聯(lián)系起來的一門分支學(xué)科，分子識別是其重要理論基礎(chǔ)。研究領(lǐng)域：受體顯像基因顯像重組單抗片段、肽類放射性藥物及微型抗體。特點：1）深入分子水平認識疾病，通過細胞信息傳導(dǎo)、基因表達、生化代謝等多個方面，在解剖學(xué)和功能癥狀出現(xiàn)之前發(fā)現(xiàn)病變信息。2）通過特定示蹤劑，將疾病與基因表達的改變聯(lián)系起來，提高疾病診治的層次。3）當代分子生物學(xué)研究成果是其理論源泉。4）分子識別是分子核醫(yī)學(xué)的理論基石。5）生化代謝的評價是其理論重要組成部分。二、當前的幾個熱門研究領(lǐng)域（六個領(lǐng)域）1、受體顯像：舉例a

2、、b、c2、受體介導(dǎo)的放射配體治療3、放免顯像（RII）4、放免治療（RIT）5、基因顯像和基因放射治療原理：將放素標記的反義寡核苷酸注入受試者體內(nèi)，由于體內(nèi)癌基因等有過度表達，通過體內(nèi)核酸分子雜交而與相應(yīng)靶基因結(jié)合，以定位、定量顯示特異靶基因，從而進行基因診斷以及破壞相應(yīng)致病基因而達到治療的目的。反義寡核苷酸基因顯像劑的特點：1）分子量小4）無免疫原性2）穿透力強5）與靶結(jié)合快3）特異性高6）靶/非靶比值高反義寡核酸的基本要求：P303基因顯像必備條件：1）胞漿中必須有足夠的mRNA基因產(chǎn)物標記反義探針必須與靶細胞特異選擇性結(jié)合并保持穩(wěn)定。6、代謝顯像：主要指PET顯像原

3、理：β+衰變的放素與體內(nèi)靶物質(zhì)作用而損失能量被吸收、轉(zhuǎn)化為二個方向相反的高能r光子。它提供了很好的空間定位信息，經(jīng)計算機處理重新購成清晰的三維圖像。β+核素特點：大部分為人體基本元素，全部為人工生產(chǎn)湮滅輻射可獲得三維圖像T1/2短，一次可給較大劑量，圖像清晰重復(fù)給藥，動態(tài)觀察。臨床應(yīng)用舉例：18F-萄糖研究腦功能狀況，老年癡呆時攝取18F-萄↓，測腦部放射性下降。腦瘤區(qū)18F-萄↑。三、分子生物學(xué)中的示蹤技術(shù)及應(yīng)用P271（一）核酸標記：標記上放射性核素的又叫探針，或叫基因探針。1、探針分類：基因組DNA探針CDNA探針以mRNA為模板CRNA探針反向合成的DNA片段人工合

4、成寡核……探針的標記物分類放素：32P33P35S3H14C125I等非放：生物素、地高辛等。兩類探針的比較：放素探針非放探針靈敏度高、應(yīng)用廣對人體有害、壽命短靈敏度低，對核酸分子有修飾作用，但無放射危害，壽命長六種常用的放素的性質(zhì)、特點P273表11—12、核酸探針的具體標記方法：體內(nèi)標記：將32P—磷酸鹽加到細胞或細菌培養(yǎng)體系中，使32P參入新合成的核酸分子上。酶促法體外標記：很常用，先將核素預(yù)先標記在核苷酸上，然后利用多種核酸聚合酶將核苷酸參入到探針分子中或交換到探針分子中去。常見的幾種外標記方法：1）DNA缺口平移法：已有試劑盒提供如Amashema,promega

5、,BR2等公司。2）隨機引物法：也有試劑盒上市。兩種方法注意點：①模板越小，產(chǎn)物的比活度越高；②產(chǎn)物的長度與加入寡核苷酸引物的量成正比；③有5種原因常引起標記礙障：a、DNA雙鏈未充分變性；b、DNA純度不佳；c、Klenow酶效價不夠；d、DNA片段太少，G50分離時丟失；e、DNA用量過大或過少。3）單鏈DNA探針標記：在M13噬菌體的環(huán)狀單鏈上合成互補DNA鏈時參入放素。4）CDNA探針標記：以mRNA為模板，在引物和四種脫氧核糖核苷三磷酸（dNTP，其中一種為標記物）存在下，經(jīng)酶促聚合反應(yīng)合成互補標記CDNA。5）RNA探針標記：P2756）DNA探針的5’端標記：

6、P2757）DNA探針的3’端標記：P2768）PCR-DNA標記：PCR擴增時通過合成DNA將32P-dNTP參入到DNA分子中達到標記作用。將32P—dNTP參入到DNA分子中達到標記作用。3、核酸標記的檢測核酸標記方法很多，雖已大部分商品化和標準化，但環(huán)節(jié)繁雜，試劑質(zhì)量及操作等影響因素多，標記完成后應(yīng)定性、定量檢測。參入核酸中的cpm主要兩個指標：參入比=-----------------------100%加入的標記品總cpm比活性：指每微克核酸中的放射性計數(shù)cpm/μgDNA(RNA)4、核酸標記注意事項：1）同位素的安全防護2）核酸原料一般用50-150ng，越

7、少，產(chǎn)品比活度越高。3）標記前體32P-dNTP，用時須真空抽干4）使用的Ependoff管和吸頭需先硅化、防止吸附。5）標記物應(yīng)及時用，-20℃可保存1~3天6）嚴格按廠家說明書操作，最好做預(yù)實驗。7）個別標記方法標記前需做DNA變性處理。（二）核酸分子雜交技術(shù)定義：具有一定同源性的核酸單鏈在一定條件下按鹼基互補原則形成異源雙鏈的過程。雜交步驟：核酸探針與核酸樣品（處理好的）混合→反應(yīng)→漂洗→ARGor測量→分析。固相雜交：1）Southern印跡雜交：P277、查DNA序列，分析基因結(jié)構(gòu)、并進行定性、定量研究。