《液相色譜基礎(chǔ)》PPT課件

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1、液相色譜基礎(chǔ)知識第一節(jié)色譜法概述第二節(jié)液相色譜法第三節(jié)液相色譜圖相關(guān)術(shù)語第四節(jié)HPLC的主要類型及原理第一節(jié)色譜法概述一、色譜法簡介二、色譜法的定義和分類三、氣相色譜和液相色譜的區(qū)別四、色譜法的分離原理關(guān)于色譜色譜是一種分離工具，而不是傳統(tǒng)意義上的分析儀器常見的分離方式：蒸餾、離心、電泳、過濾、超濾等等色譜是其中一種分離工具一、色譜法簡介色譜法（Chromatography）溯源俄國科學(xué)家Tswett1903年發(fā)現(xiàn)色譜的吸附原理，開創(chuàng)了應(yīng)用吸附原理分離植物色素的新方法并見諸于俄文的文獻(xiàn)1906年正式命名（見諸文獻(xiàn)

2、）色譜法；Chromatography50年代開始廣泛研究和應(yīng)用主要是氣相色譜及薄層色譜高效液相色譜法的廣泛應(yīng)用始于70年代色譜的發(fā)明人俄國科學(xué)家：M.S.Tswett正式命名“色譜”的文獻(xiàn)色譜起源石油醚碳酸鈣顆粒色素玻璃柱經(jīng)典液相色譜二、色譜法的定義和分類色譜法的定義：色譜法又稱色層法或?qū)游龇?，是一種利用不同溶質(zhì)(樣品)與固定相和流動相之間的作用力(分配、吸附、離子交換等)的差別，當(dāng)兩相做相對移動時(shí)，各溶質(zhì)在兩相間進(jìn)行多次“平衡”，使各溶質(zhì)達(dá)到相互分離的方法。固定相：在色譜分離中固定不動、對樣品產(chǎn)生保留的一相。

3、流動相：在層析過程中推動固定相上的物質(zhì)向一定方向移動的液體或氣體。色譜法的分類根據(jù)流動相的狀態(tài)將色譜法分成四大類。表1色譜法以流動相種類的分類色譜類型流動相主要分析對象氣相色譜法氣體揮發(fā)性有機(jī)化合物液相色譜法液體溶于水或有機(jī)溶劑的各種物質(zhì)超臨界色譜法超臨界流體各種有機(jī)化合物電色譜法緩沖溶液、電場離子和各種有機(jī)化合物1.按兩相分子的聚集狀態(tài)分類2.按固定相的固定方式分類平面色譜紙色譜薄層色譜高分子薄膜色譜柱色譜填充柱色譜毛細(xì)管柱色譜分配色譜：利用分配系數(shù)的不同吸附色譜：利用物理吸附性能的差異離子交換色譜：利用離子交

4、換原理空間排阻色譜：利用排阻作用力的不同3.按分離機(jī)制分類流動相固定相類型液體固體液-固色譜液體液體液-液色譜氣體固體氣-固色譜氣體液體氣-液色譜液相色譜氣相色譜三、液相色譜與氣相色譜的比較液相色譜所用基本概念與所用基本理論均與氣相色譜一致。但由于在液相色譜中以液體代替氣相色譜中的氣體作為流動相，而液體和氣體的性質(zhì)不相同；此外，液相色譜所用的儀器設(shè)備和操作條件也與氣相色譜不同，所以，液相色譜與氣相色譜有一定差別。（1）應(yīng)用范圍不同氣相色譜僅能分析在操作溫度下能氣化而不分解的物質(zhì)。對高沸點(diǎn)化合物、非揮發(fā)性物質(zhì)、熱不

5、穩(wěn)定化合物、離子型化合物及高聚物的分離、分析較為困難；而液相色譜則不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制，它非常適合分子量較大、難氣化、不易揮發(fā)或?qū)崦舾械奈镔|(zhì)、離子型化合物及高聚物的分離分析。（2）液相色譜能完成難度較高的分離工作①氣相色譜的流動相載氣是惰性的，不參與分配平衡過程，與樣品分子無親和作用，樣品分子只與固定相相互作用。而在液相色譜中流動相液體也與固定相爭奪樣品分子，為提高選擇性增加了一個因素。②液相色譜固定相類型多，如離子交換色譜和排阻色譜等，作為分析時(shí)選擇余地大；而氣相色譜是不可能的。③液相色譜通常在室溫

6、下操作，較低的溫度，一般有利于色譜分離條件的選擇。四、色譜法的分離原理1．液固色譜法分離原理：使用固體吸附劑，根據(jù)固定相對樣品組分吸附力大小不同而分離。分離過程是一個吸附－解吸附的平衡過程。吸附劑：為硅膠或氧化鋁，粒度5-10μm。適用對象：適用于分離分子量200-1000的組分，大多數(shù)用于非離子型化合物，常用于分離同分異構(gòu)體。2．液液色譜法使用將特定的液態(tài)物質(zhì)涂于基質(zhì)表面，或化學(xué)鍵合于基質(zhì)表面而形成的固定相，分離原理是根據(jù)被分離的組分在流動相和固定相中溶解度不同而分離。分離過程是一個分配平衡過程。液液色譜法按固

7、定相和流動相的極性不同可分為正相色譜法(NPC)和反相色譜法(RPC)。正相色譜法采用極性固定相（如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相）；流動相為相對非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環(huán)已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調(diào)節(jié)組分的保留時(shí)間。常用于分離中等極性和極性較強(qiáng)的化合物。反相色譜法一般用非極性固定相（如C18、C8）；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、丙酮、四氫呋喃等與水互溶的有機(jī)溶劑以調(diào)節(jié)保留時(shí)間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。正相色譜法與反相色譜法比較表正相色譜法反相色譜法固

8、定相極性高-中中-低流動相極性低-中中-高組分洗脫次序極性小先洗出極性大先洗出第二節(jié)液相色譜法一、液相色譜的分類二、高效液相色譜的特點(diǎn)三、高效液相色譜法的儀器配置四、高效液相色譜的基本流程五、高效液相色譜的應(yīng)用液相色譜的分類根據(jù)固定相的使用形式將液相色譜分成以下幾類：1.柱色譜：固定相裝在玻璃管或金屬管內(nèi)，或涂在柱內(nèi)壁上。又分為填充柱色譜和空心毛細(xì)管色譜兩種類型。2.紙色