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《《液相色譜實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)》PPT課件》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫(kù)。
1、液相色譜基礎(chǔ)本章內(nèi)容：液相色譜發(fā)展史液相色譜的基本概念影響峰形擴(kuò)展的因素歷史回顧1906-MikhailSemenovichTswett(1872-1919)碳酸鈣吸附劑石油醚1940‘s-分配色譜和紙色譜1950‘s-氣相,薄層，凝膠過濾色譜梯度洗脫色譜1960‘s-商業(yè)高效液相色譜.0NNNNMgCHCH23CH3CH3HC30CH3CH3CH30CH300高效液相色譜(HPLC)進(jìn)樣口檢測(cè)器色譜圖色譜柱溶劑泵混合器HPLC結(jié)構(gòu)框圖HPLC結(jié)構(gòu)框圖液相色譜類型TypesofCompoundsSeparatedNeutralsWeakAcidsW
2、eakBasesIonics,Bases,AcidsCompoundsInsolubleinWater,OrganicIsomersIonicsInorganicIonsHighMWCompoundsPolymersModeReversed-PhaseIo子n-PairNormal-PhaseIonExchangeSizeExclusionStationaryPhaseC-18,C-8,C-18,C-8Silica,Amino,CyanoDiolAnionorCationExchangePolystyreneMobilePhaseWater/Org
3、anicModifiersWater/OrganicIon-PairReagentOrganicsAqueous/BufferCounterIonGelFiltration-AqueousGelPermeation-OrganicSilicaResinC-4,C-2化合物類型模式固定相流動(dòng)相中性弱酸弱堿反相C18,C8,C4氰基,氨基水/有機(jī)改性劑離子、堿性、酸性離對(duì)C-18,C-8水/有機(jī)的離子對(duì)試劑不溶于水的化合物正相硅膠、氨基、腈基、二醇有機(jī)物離子型無機(jī)離子離子交換陰離子或陽離子交換樹脂水/緩沖溶液對(duì)離子高分子量化合物聚合物體積排阻聚苯乙烯硅
4、膠凝膠過濾-水性的凝膠滲透-有機(jī)的色譜參數(shù)DetectorResponseTimeABWWABInjectt0tR(A)tR(B)t=保留時(shí)間t=死時(shí)間RW=峰底寬度0－定性和定量tR(B)-tR(A)WA+WBR=2tR(B)-tR(A)W1/2A+W1/2B=1.176K’=tR-t0t0不同R值的峰重疊R=1.5可以得到基線分離0.40.50.60.70.81.001.25影響R值的因素ΔtW=R=1/4Nxα-1xk'1+k'容量因子選擇性柱效α容量因子各組份的容量因子（K’）隨溶劑洗脫強(qiáng)度的變化增大或縮小增加流動(dòng)相的洗脫強(qiáng)度，降低了洗脫物
5、的容量因子對(duì)于反相色譜，增加10％的有機(jī)組成等于降低每個(gè)色譜峰的K’值的1/2到2/3。溶劑洗脫強(qiáng)度弱溶劑洗脫強(qiáng)度強(qiáng)246810110070030010060%AcetonitrileTime(min.)mAU20001600600080%AcetonitrileTime(min.)mAU100040%Water20%Water246810分離選擇性改用不同的流動(dòng)相改變流動(dòng)相的組成改變流動(dòng)相pH值改變柱溫應(yīng)用特殊的化學(xué)效應(yīng)改變固定相(α)改變分離選擇性α的方法t0=1=k'k'BAAB23AB12AB12==1.641.58=1.04=1.150.
6、85=1.35=0.950.63=1.50k'k'BAαααα溫度對(duì)分離選擇性α的影響40℃60℃1005TimeinMinutes柱效DetectorResponseInjectTime高柱效低柱效擴(kuò)散h=A+CuBu.HETPBuC.uA線速度A=渦流擴(kuò)散B=自由分子擴(kuò)散C=傳質(zhì)阻力范德姆特方程TheVanDeemterEquation+AA=渦流擴(kuò)散——多徑擴(kuò)散仔細(xì)填充柱子使用均一的載體線速度HETP擴(kuò)散初始帶寬最終帶寬擴(kuò)散BB=自由分子擴(kuò)散——縱向擴(kuò)散在液相中影響小在低流速中影響大線速度HETP?擴(kuò)散C.uC=傳質(zhì)阻力在低流速下可以降低傳質(zhì)
7、阻力使用小顆粒載體可以降低傳質(zhì)阻力HETP線速度滯流的流動(dòng)相流動(dòng)相固定相柱外效應(yīng)樣品體積I.連接管路的體積色譜柱進(jìn)口設(shè)計(jì)色譜柱出口設(shè)計(jì)檢測(cè)池體積(<10μL)II.III.IV.V.降低輸出回路響應(yīng)時(shí)間VI.如何提高分離度通過下述方法增加保留時(shí)間:選擇合適的分離參數(shù)增加色譜柱長(zhǎng)度增加固定相濃度通過下述方法降低譜帶寬度:使用均一的載體仔細(xì)填充柱子選擇粒度小的載體優(yōu)化流速減小進(jìn)樣量降低系統(tǒng)死體積降低輸出回路響應(yīng)時(shí)間HPLC儀器簡(jiǎn)介本章內(nèi)容：流動(dòng)相及貯液罐高壓輸液泵及梯度洗脫裝置進(jìn)樣裝置色譜柱檢測(cè)器色譜數(shù)據(jù)處理裝置優(yōu)化流路減小死體積流路自上而下堆積配置手
8、持控制器檢測(cè)器柱溫箱自動(dòng)進(jìn)樣器泵脫氣機(jī)溶劑柜HP-IB外設(shè)(x4)每個(gè)部分有獨(dú)立的電源1100各部件均由CAN線連接檢測(cè)器
