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1、液相色譜基礎(chǔ)知識色譜的發(fā)明人俄國科學(xué)家：M.S.Tswett正式命名“色譜”的文獻(xiàn)一、色譜起源石油醚碳酸鈣顆粒色素玻璃柱經(jīng)典液相色譜色譜法簡介色譜法（Chromatography）溯源俄國科學(xué)家1903年發(fā)現(xiàn)色譜的吸附原理，開創(chuàng)了應(yīng)用吸附原理分離植物色素的新方法并見諸于俄文的文獻(xiàn)1906年正式命名（見諸文獻(xiàn)）色譜法；Chromatography50年代開始廣泛研究和應(yīng)用主要是氣相色譜及薄層色譜高效液相色譜法的廣泛應(yīng)用始于70年代色譜分離的機(jī)理色譜是一種分離技術(shù)色譜分離是一個物理過程流動相（MobilePhase）固定相（StationaryPhase）樣品（溶解
2、于流動相中的溶質(zhì)）液相色譜分離機(jī)理高效液相色譜是一種以液體作流動相和固體微粒作固定相，待測組分在柱內(nèi)的兩相之間進(jìn)行高速分配和高效分離的柱液體色譜方法。樣品溶液中的各組分，因其物理化學(xué)性質(zhì)的微小差異，當(dāng)其隨流動相進(jìn)入色譜柱后，便在柱的兩相之間產(chǎn)生不同的相互作用力，從而導(dǎo)致柱上遷移速率的微小差異。隨著流動相的連續(xù)推移，這種微小的差異被不斷擴(kuò)大，直至柱內(nèi)出現(xiàn)明顯不同的遷移距離，使最終達(dá)到組分完全分離。什么是液相色譜氣相色譜：流動相是氣相液相色譜：流動相是液相什么是高效液相色譜HighPerformanceLiquidChromatography高效液相色譜法，簡稱：H
3、PLC是一種區(qū)別于經(jīng)典液相色譜；基于儀器方法的高效能分離手段：高性能的色譜柱，高精度、耐高壓的輸液泵以及高靈敏度的檢測器……廣泛應(yīng)用于各個領(lǐng)域：醫(yī)藥/環(huán)保/石化/生命科學(xué)/食品及農(nóng)業(yè)……在技術(shù)，理論及應(yīng)用上仍處于發(fā)展階段液相色譜的基本流程圖流動相泵色譜柱檢測器泵輸液分離檢測記錄儀和積分儀-色譜工作站AEGBCDF進(jìn)樣閥進(jìn)樣HPLC的儀器配置色譜泵（主機(jī)）自動進(jìn)樣器色譜柱及柱溫箱檢測器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)溶劑流動相高效液相色譜基本概念＊色譜峰或色譜譜帶＊基線噪音＊基線漂移＊檢測限（敏感度）＊色譜峰對稱性＊色譜定性參數(shù)＊色譜柱效能參數(shù)液相色譜圖相關(guān)術(shù)語色譜峰－Peak色譜柱
4、流出組分通過檢測器時產(chǎn)生的響應(yīng)信號的微分曲線峰底－PeakBase峰的起點(diǎn)與終點(diǎn)之間連接的直線峰高－PeakHeight峰最大值到峰底的距離峰寬－PeakWidth在峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作切線與峰底相交兩點(diǎn)之間的距離半（高）峰寬－PeakWidthatHalfHeight通過峰高的中點(diǎn)作平行于峰底的直線，其與峰兩側(cè)相交兩點(diǎn)之間的距離液相色譜圖相關(guān)術(shù)語峰面積－PeakArea峰與峰底之間的面積標(biāo)準(zhǔn)偏差；σ－StandardError0.607倍峰高處所對應(yīng)峰寬的一半拖尾峰－TailingPeak后沿較前沿平緩的不對稱峰前伸峰－LeadingPeak前沿較后沿平緩的不對稱
5、峰鬼峰－GhostPeak并非由試樣所產(chǎn)生的峰；亦稱假峰液相色譜圖相關(guān)術(shù)語基線－Baseline在正常操作條件下，僅由流動相所產(chǎn)生的響應(yīng)信號的曲線基線漂移－BaselineDrift基線隨時間定向的緩慢變化基線噪聲；N－BaselineNoise由各種因素所引起的基線波動譜帶擴(kuò)展－BandBroadening由于縱向擴(kuò)散,傳質(zhì)阻力等因素的影響,使組分在色譜柱內(nèi)移動過程中譜帶寬度增加的現(xiàn)象液相色譜圖相關(guān)術(shù)語死時間，t0－Deadtime不被固定相滯留的組分，從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰最大值所需的時間保留時間，tR－Retentiontime組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰最大值所需的時間死
6、體積，V0－Deadvolume不被固定相滯留的組分，從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰最大值所需的流動相體積保留體積，VR－Retentionvolume組分從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰最大值所需的流動相體積液相色譜實(shí)驗(yàn)所需的基本參數(shù)液相色譜實(shí)驗(yàn)所需的基本參數(shù)流動相：種類及配比，等度或梯度固定相：色譜柱類型及內(nèi)徑、粒徑、長短流動相流速檢測器參數(shù)：紫外檢測波長或其他檢測器相應(yīng)參數(shù)柱溫度進(jìn)樣量以上參數(shù)即構(gòu)成一個具體的HPLC方法，亦稱色譜條件色譜圖：HPLC圖形結(jié)果 （Chromatogram）色譜圖即色譜柱流出物通過檢測器時所產(chǎn)生的響應(yīng)信號對時間的曲線圖，其縱坐標(biāo)為信號強(qiáng)度，橫坐標(biāo)為保留時間?！?/p>
7、色譜峰保留時間（分）基線↓峰高峰寬響應(yīng)值色譜峰或色譜譜帶流出曲線上的突起部分稱為色譜峰正常色譜峰為對稱形正態(tài)分布曲線不對稱色譜峰有兩種：前延峰和拖尾峰色譜流出曲線圖及相關(guān)參數(shù)樣品進(jìn)入色譜柱，經(jīng)流動相沖洗，由檢測器測得的信號-洗脫時間曲線，即色譜圖。檢測限（敏感度）常用基線噪音的三倍表示：S/N=3式中：N為噪音（mV或mAU)S為信號(mV或mAU)對稱因子計(jì)算示意圖色譜峰的對稱性—對稱因子：a.拖尾因子b.不對稱因子峰對稱因子計(jì)算公式對稱因子(fs)：式中：fs=0.95~1.05為正常峰fs＜0.95為前延峰fs＞1.05為拖尾峰色譜柱效能參數(shù)計(jì)算示意圖色譜
8、柱的柱效N理論塔板數(shù)計(jì)算
