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《實習(xí)二紅細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在教育資源-天天文庫。
1、實驗診斷實習(xí)二紅細(xì)胞、網(wǎng)織紅細(xì)胞檢測目的和要求熟悉正常紅細(xì)胞和網(wǎng)織紅細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特點掌握血紅蛋白測定方法、參考值和臨床意義掌握血細(xì)胞多參數(shù)報告單的正常值及其增減的臨床意義紅細(xì)胞計數(shù)(redbloodcellcount)紅細(xì)胞計數(shù)是取一定微量血液，經(jīng)稀釋后計算出血液內(nèi)所含紅細(xì)胞數(shù)目原理：用等滲稀釋液將全血稀釋至一定倍數(shù)，充入血細(xì)胞計數(shù)池，在光學(xué)顯微鏡下計數(shù)一定體積內(nèi)的紅細(xì)胞數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液中的紅細(xì)胞數(shù)量方法：顯微鏡計數(shù)法器材及試劑：取血吸管，一次性定量采血管(20ul)計數(shù)板：是一塊厚玻璃制成，板上刻度分為9個大方格面積為
2、Imm2。中央大方格用于紅細(xì)胞計數(shù)，被雙線等分成25個中方格，每個中方格又劃分為16個小方格。計數(shù)板與蓋玻片組成計數(shù)池，計數(shù)池深度為0.1mm顯微鏡、蓋玻片、刺血針、棉花等小試管、刻度吸管、紅細(xì)胞稀釋液。其它:75%酒精棉球及干棉球操作:取血：選擇耳垂邊緣或指端，先用75%酒精棉球消毒局部皮膚。等待干后，用消毒后的刺血針刺入皮膚，深約2毫米。待血液從針孔流出，用于棉花擦去第一滴血輕輕擠壓，使血液流出形成綠豆大小的血滴。操作者用右手平拿取血吸管尖端浸入血滴中，緩緩吸血恰至“10”刻度處為止。然后用干棉花擦凈吸管外沾附的血液稀釋及
3、混勻先準(zhǔn)備一清潔小試管，精確滴入紅細(xì)胞稀釋液1.99毫升，備用將取好的血液立即擠入上述試管中，并來回吸取小量稀釋液數(shù)次，以便將殘余在吸管中的血液全部洗凈搖動試管，充分混勻。此時血液被稀釋200倍充池先將計數(shù)板及蓋玻片擦干凈，并將蓋玻片復(fù)蓋于計數(shù)池上面。用吸管吸取己充分混勻的稀釋血液一滴，滴于蓋玻片的下方邊緣處，稀釋血液即充填入計數(shù)池中。注意勿發(fā)生氣泡或使稀釋血液流入計數(shù)池旁小槽內(nèi)靜置2－3分鐘，待紅細(xì)胞完全下沉穩(wěn)定后進行計數(shù)計數(shù)平放計數(shù)板于顯微鏡臺上，先用低倍鏡找到計數(shù)池的中央大方格。觀察紅細(xì)胞是否均勻，并調(diào)整至視野中間。再轉(zhuǎn)
4、換高倍鏡計數(shù)。鏡下紅細(xì)胞為圓形或盤形、略帶黃色的細(xì)胞。如將上側(cè)線和左側(cè)線上的紅細(xì)胞都計數(shù)在內(nèi)，則不要再將下側(cè)和右側(cè)線上的細(xì)胞計入。計數(shù)時必須按一定方向和順序，以免將紅細(xì)胞重復(fù)計數(shù)或漏數(shù)。計數(shù)5個中方格(即四角的及中央的中方格)由紅細(xì)胞總共的個數(shù)，將其結(jié)果乘以10。即得每立方毫米血液中所含紅細(xì)胞數(shù)目，再乘以10。即得每升血液中所含紅細(xì)胞數(shù)目。每升血液中紅細(xì)胞數(shù)目=五個中方格內(nèi)紅細(xì)胞個數(shù)×5(變?yōu)?.1u1)×10(變?yōu)?u1)×106(變?yōu)?L)×200(稀釋倍數(shù))=五個中方格內(nèi)紅細(xì)胞個數(shù)×1010清潔儀器：計數(shù)后，將蓋玻片及計
5、數(shù)板用水沖洗干凈，再用綢或細(xì)布擦干吸管先用蒸餾水，繼用95%酒精，后用乙醚洗滌干凈，保存?zhèn)溆米⒁馐马棽荒茉谟兴[、炎癥、淤血等部位或刺血過淺處采血所用吸管、試管、滴管及血細(xì)胞計數(shù)板須干凈無水操作迅速，充池一次完成，不能有氣泡紅細(xì)胞分布不均，每個中方格之間相差大于20個時要重新充池計數(shù)血紅蛋白測定方法：氰化高鐵血紅蛋白測定法原理：血紅蛋白(Hb)被高鐵氰化鉀[K3Fe(CN)6]氧化為高鐵血紅蛋白（Hi），Hi與氰離子結(jié)合成氰化高鐵血紅蛋白（HiCN）HiCN在540nm有一吸收峰測定其光密度而得血紅蛋白濃度[試劑與器材]器材：
6、分光光度計試管，試管架取血吸管:一次性定量采血管(20ul)刺血針蒸餾水75%酒精及干棉球試劑：氰化高鐵血紅蛋白稀釋劑高鐵氰化鉀[K3Fe(CN)6]200mg氰化鉀（KCN）50mg無水磷酸二氫鉀140mgTritonX-1001.0ml用蒸餾水溶解并稀釋 至1L該試劑應(yīng)呈透明、淡黃色，pH在7.0～7.4之間，以蒸餾水作空白，在540nm比色，讀數(shù)是0溶液應(yīng)放置棕色試劑瓶中，塞緊后保存于冰箱中（但不宜凍結(jié)），至少可穩(wěn)定數(shù)月如發(fā)現(xiàn)試劑變綠、渾濁則不能使用其中非離子表面活性劑可加速溶血，縮短轉(zhuǎn)化時間，防止血漿蛋白改變引起的渾濁
7、[實驗步驟]在試管中準(zhǔn)確加入HiCN稀釋試劑5.0ml，作為測定管用血紅蛋白吸管準(zhǔn)確吸取全血20u1，擦去管端血跡，置于試劑中，沖洗3次，混勻?qū)⒒旌弦悍胖?分鐘以后，倒入光徑1cm比色皿，用分光光度計在540nm進行比色以蒸餾水或HiCN稀釋試劑作空白管，校正光密度到0點，讀取測定管光密度讀數(shù)計算：血紅蛋白（g/L）=測定管光密度×（64458/44000）×251=測定管光密度A×367.7式中：（1）64458是目前國際公認(rèn)的血紅蛋白分子量 （2）44000是國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會公布的血紅蛋白摩爾吸光度 （3）251是稀
8、釋倍數(shù)[方法評估]HiCN法操作簡便，試劑單一，顯色快且穩(wěn)定，可以根據(jù)吸光度直接計算結(jié)果－－被列為國際血紅蛋白測定的參考方法，也是我國推薦的首選方法高球蛋白血癥和白細(xì)胞明顯增高－－可導(dǎo)致反應(yīng)液渾濁而影響結(jié)果[注意事項]用吸血管吸血過程應(yīng)仔細(xì)、認(rèn)真，準(zhǔn)確把握住吸入的血液量是初學(xué)
