小白鼠肝細(xì)胞線粒體的超活染色及觀察 實(shí)驗(yàn)報(bào)告

小白鼠肝細(xì)胞線粒體的超活染色及觀察 實(shí)驗(yàn)報(bào)告

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1、山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告2015年5月10日姓名班級(jí)13級(jí)生命基地班學(xué)號(hào)同組者:科目細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)題目小白鼠肝細(xì)胞線粒體的超活染色及觀察【實(shí)驗(yàn)題目】小白鼠肝細(xì)胞線粒體的超活染色及觀察【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、掌握線粒體的超活染色原理及方法。2、觀察動(dòng)物肝細(xì)胞內(nèi)線粒體的形態(tài)、數(shù)量與分布?!緦?shí)驗(yàn)材料與用品】1.?試劑:0.02%的詹納綠B染液、Ringer試劑?2.?器具:解剖盤、鑷子、剪刀、雙凹片、小燒杯、載玻片、蓋玻片、膠頭滴管、顯微鏡等3.?材料:小鼠【實(shí)驗(yàn)原理】I.線粒體線粒體是一種存在于大多數(shù)細(xì)胞中的由兩層膜包裹的細(xì)胞器,直徑在0.5-10微米左右;線粒體是細(xì)胞內(nèi)氧化磷酸化和合成三磷酸腺苷的

2、主要場(chǎng)所,為細(xì)胞的活動(dòng)提供了能量,有“細(xì)胞動(dòng)力工廠”之稱。線粒體在代謝活動(dòng)旺盛的細(xì)胞,如肌肉細(xì)胞,肝細(xì)胞,神經(jīng)細(xì)胞等中大量存在;線粒體的數(shù)量差異巨大,如在肝臟細(xì)胞中有1000-2000個(gè)線粒體,而有些細(xì)胞只有一個(gè)線粒體,如酵母菌細(xì)胞的大型分支線粒體,大多數(shù)哺乳動(dòng)物成熟紅細(xì)胞不具有線粒體。線粒體分布方向與微管一致,通常分布在細(xì)胞功能旺盛的區(qū)域:如在腎臟細(xì)胞中靠近微血管,呈平行或柵狀排列;在腸表皮細(xì)胞中呈兩極分布,集中在頂端和基端,在精子中分布在鞭毛中區(qū)。第6頁(yè)共6頁(yè)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告2015年5月10日姓名班級(jí)13級(jí)生命基地班學(xué)號(hào)同組者:科目細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)題目小白鼠

3、肝細(xì)胞線粒體的超活染色及觀察II.超活染色實(shí)驗(yàn)原理超活染色也稱活體染色,是指對(duì)生命有機(jī)體的細(xì)胞或組織能著色但又無(wú)毒害的一種染色方法;超活染色的目的是顯示生活細(xì)胞內(nèi)的某些結(jié)構(gòu),而不影響細(xì)胞的生命活動(dòng)和產(chǎn)生任何物理、化學(xué)變化以致引起細(xì)胞死亡。應(yīng)用活體染色技術(shù)可用來(lái)研究生活狀態(tài)下的細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理病理狀態(tài)?;铙w染色根據(jù)染色劑的性質(zhì)和染色方法不同分為:體內(nèi)活染(注入、固定、堆積)、體外活染(分離、浸染、固定)1)體內(nèi)活染:是以膠體狀的染料溶液注入動(dòng)植物體內(nèi),染料的膠粒固定、堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊結(jié)構(gòu)里,達(dá)到易于識(shí)別的作用。2)體外活染:又稱超活染色,它是由活的動(dòng)植物分離出的細(xì)胞或組織小塊,以

4、染料溶液浸染,燃料被選擇固定在活細(xì)胞的某種結(jié)構(gòu)上而顯色。活體染色之所以能固定,堆積在細(xì)胞內(nèi)某些特殊部分,主要是染料的“電化學(xué)”特性起到重要作用;堿性染料的膠粒表面帶陽(yáng)離子,酸性染液的膠粒表面帶陰離子,被染的部分本身也是具有陽(yáng)離子或陰離子,這樣它們彼此之間就發(fā)生了吸引作用,從而使樣品著色。不是任何染料皆可以作為活體染色劑之用,應(yīng)選擇那些對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性或毒性極小的染料。活體染色劑的選擇原則:1、對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性或毒性極小的染劑2、具有電化學(xué)特性3、配成稀淡的溶液來(lái)使用4、具有專一性(特異性)5、一般是以堿性染料最為適用,可能因?yàn)樗哂腥芙庠陬愔|(zhì)(如卵磷脂、膽固醇等)的特性,易于被細(xì)胞吸收。本

5、實(shí)驗(yàn)采用的活體染色劑---詹納斯綠B第6頁(yè)共6頁(yè)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告2015年5月10日姓名班級(jí)13級(jí)生命基地班學(xué)號(hào)同組者:科目細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)題目小白鼠肝細(xì)胞線粒體的超活染色及觀察詹納斯綠B是毒性較小的堿性染料,可專一性的對(duì)線粒體進(jìn)行超活染色,這是由于線粒體內(nèi)的細(xì)胞色素氧化酶系的作用,使染料始終保持氧化狀態(tài)(即有色狀態(tài)--藍(lán)綠色);而線粒體周圍的細(xì)胞質(zhì)中,這些染料被還原呈無(wú)色的色基(即無(wú)色狀態(tài))。另外,中性紅也屬于堿性染料,對(duì)植物液泡系的染色有專一性?!緦?shí)驗(yàn)步驟】一、大體流程用詹納斯綠B染色20-30min剪下合適大小的肝組織小塊洗凈斷頭法處死小白鼠取肝組織取著色部

6、分加Ringer溶液制成懸液制片,高倍鏡觀察二、具體操作1、用斷頭法處死小白鼠,置于解剖盤中,剪開(kāi)腹腔,取出小白鼠肝組織,選取邊緣較薄的肝組織0.5cm3,放入小燒杯中,用Ringer液沖洗去血污。2、在干凈的凹面載玻片的凹穴中,滴加1/5000詹納斯綠B溶液,再將上述洗凈的肝組織移入染液中(注意:不可將組織塊完全浸沒(méi),要是組織塊至少三分之一的部分露在染液外,這樣細(xì)胞內(nèi)的線粒體酶系可充分得到氧化,易被染色)進(jìn)行染色,一般染色20—30min,以組織塊邊緣被染成藍(lán)綠色為準(zhǔn)。3、吸去染液,用剪刀將組織塊著色部分剪下重置小燒杯中,滴加Ringer溶液0.5ml,用剪刀將組織充分剪碎制成懸液

7、。4、取上述細(xì)胞懸液滴片,加上蓋玻片,在高倍鏡下觀察。第6頁(yè)共6頁(yè)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告2015年5月10日姓名班級(jí)13級(jí)生命基地班學(xué)號(hào)同組者:科目細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)題目小白鼠肝細(xì)胞線粒體的超活染色及觀察【實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析】I.實(shí)驗(yàn)結(jié)果理想狀態(tài)下小鼠肝細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中的線粒體應(yīng)被染成藍(lán)綠色,在高倍鏡(10*40)下觀察到的結(jié)果如下:圖1:10*40倍顯微鏡下觀察小鼠肝細(xì)胞圖2:10*40倍顯微鏡下觀察圖II.實(shí)驗(yàn)分析在打開(kāi)小鼠腹腔后,可找到呈淡紅褐色

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