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《一種簡(jiǎn)單的分離_培養(yǎng)及鑒定小鼠外周血單核巨噬細(xì)胞方法的建立_楊琳》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線(xiàn)閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫(kù)。
1、2015年8月首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)Aug．2015第36卷第4期JournalofCapitalMedicalUniversityVol.36No.4［doi:10．3969/j．issn．1006-7795．2015．04．019］·基礎(chǔ)研究·一種簡(jiǎn)單的分離、培養(yǎng)及鑒定小鼠外周血單核巨噬細(xì)胞方法的建立*楊琳田蕾謝杰施李麗英(首都醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞生物學(xué)系，肝臟保護(hù)與再生調(diào)節(jié)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京100069)【摘要】目的在L929條件培養(yǎng)基的作用下體外分離、培養(yǎng)小鼠外周血單核巨噬細(xì)胞，并進(jìn)行鑒定。方法密度梯度離心法分離小鼠外周血單核巨噬細(xì)胞，用L929條件培養(yǎng)基培養(yǎng)
2、7d。采用免疫熒光的方法檢測(cè)F4/80的表達(dá)以及細(xì)胞的吞噬作用，用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)一步檢測(cè)細(xì)胞吞噬率。結(jié)果用L929條件培養(yǎng)基誘導(dǎo)培養(yǎng)7d后小鼠外周血單核細(xì)胞表達(dá)F4/80，加入細(xì)胞吞噬珠之后，在不同時(shí)間點(diǎn)用熒光顯微鏡可以看到紅色熒光顆粒聚集在小鼠外周血單核巨噬細(xì)胞核周?chē)昧魇郊?xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的吞噬率為24．8%±0．79%。結(jié)論該方法是一種簡(jiǎn)單、易操作的體外分離培養(yǎng)和鑒定小鼠外周血單核巨噬細(xì)胞的方法?！娟P(guān)鍵詞】小鼠;外周血單核巨噬細(xì)胞;分離培養(yǎng);鑒定【中圖分類(lèi)號(hào)】Q2Establishmentofasimplemethodforseparation，cultu
3、reandidentificationofmouseperipheralbloodmonocyte/macrophage*YangLin，TianLei，XieJieshi，LiLiying(DepartmentofCellBiology，MunicipalLaboratoryforLiverProtectionandＲegulationofＲegeneration，CapitalMedicalUniversity，Beijing100069，China)【Abstract】ObjectiveTheaimofthisstudyistoseparate，cul
4、tivateandidentifymouseperipheralbloodmonocyte/macrophages(PBM)inL929－conditionedmedium．MethodsMousePBMwasisolatedbycentrifugation，andculturedwithL929-conditionedmediumfor7days．PBMwasidentifiedbyimmunofluorescenceandflowcytometry(FCM)．ＲesultsPBMdisplaytheimmunophenotypeofmonocyte/ma
5、crophageandwithphagocyticfunction．ConclusionItwasasimplemethodforseparation，cultureandidentificationofmousePBMinvitro．【Keywords】mouse;peripheralbloodmacrophages;isolationandcultivation;identification巨噬細(xì)胞是由血液中的單核細(xì)胞分化而來(lái)，單核1材料與方法細(xì)胞來(lái)源于骨髓中的造血干細(xì)胞，穩(wěn)定狀態(tài)下在外周［1-3］血、骨髓和脾中循環(huán)。巨噬細(xì)胞在體內(nèi)扮演著重1．1實(shí)驗(yàn)材料
6、要的角色，它在抗感染、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)中起著非1)動(dòng)物:ICＲ小鼠(30只)，體質(zhì)量28～30g，SPF常重要的作用。巨噬細(xì)胞廣泛分布于機(jī)體的各個(gè)組級(jí)，5～6周齡，購(gòu)于首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物部，實(shí)驗(yàn)動(dòng)織與器官中，如肝、脾、淋巴結(jié)、骨髓、胸腔、腹腔、血物許可證號(hào):SYXK(京)2010-0020。液、皮膚等。L929是小鼠成纖維細(xì)胞株，其培養(yǎng)上清2)主要儀器:離心機(jī)(美國(guó)Eppendorf公司)，細(xì)含有較高濃度的巨噬細(xì)胞集落刺激因子，可以使巨噬胞培養(yǎng)箱(美國(guó)Thermo公司)，流式細(xì)胞儀(美國(guó)BD細(xì)胞活化，誘導(dǎo)其中單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞分化發(fā)育。公司)，熒光顯微鏡(
7、日本Leica公司)。本實(shí)驗(yàn)以小鼠外周血單核巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象，探索3)主要試劑:DMEM培養(yǎng)基(美國(guó)Gibco公司)，建立一種巨噬細(xì)胞體外分離培養(yǎng)和鑒定的方法。胎牛血清(英國(guó)Biochrom公司)，F(xiàn)4/80抗體(美國(guó)基金項(xiàng)目:國(guó)家自然科學(xué)基金(81430013)，北京市屬高等學(xué)校創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)與教師職業(yè)發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(IDHT20150502)。ThisstudywassupportedbyNationalNaturalScienceFoundationofChina(81430013)，ProjectofConstructionofInnovativeTe
8、amsandTeacherCareerDevelop
