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1、海南醫(yī)學(xué)2014年lO月第25卷第19期HainanMedJ，Oct．2014，Vo1．25，No．19doi：10．3969／j．issn．1003—6350．2014．19．1109·論著·小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的分離培養(yǎng)與鑒定張淑莉，李素芬。(1．西安醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)系檢驗(yàn)中心，陜西西安710021；2．陜西省地方病研究所，陜西西安710003【摘要】目的建立一種小鼠腹腔巨噬細(xì)胞體外分離培養(yǎng)的簡(jiǎn)便方法。方法以無血清的RPMI1640培養(yǎng)液灌洗小鼠腹腔，分離獲取小鼠腹腔巨噬細(xì)胞，在含有10％d~牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液中培養(yǎng)。通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)細(xì)胞活力，瑞氏染色計(jì)算
2、純度，細(xì)胞吞噬墨汁顆粒測(cè)定其吞噬率，鑒定這些細(xì)胞是巨噬細(xì)胞。結(jié)果本實(shí)驗(yàn)獲得高純度的巨噬細(xì)胞，具備巨噬細(xì)胞的形態(tài)特征。結(jié)論該方法是一種簡(jiǎn)便的巨噬細(xì)胞體外分離培養(yǎng)方法?！娟P(guān)鍵詞】小鼠；巨噬細(xì)胞；分離培養(yǎng)；鑒定【中圖分類號(hào)】R-332【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1003----6350(2014)l9___2814--o2Separation，cultivationandidentificationofmouseperitonealmacrophages．ZHANGShu-li，LISu-fen．J．TestingCenter,DepartmentofMedicalTechnology,X
3、i'anMedicalUniversity,Xi'an710021，Shaanxi,CHINA；2．EndemicDiseaseResearchl’li#uteofShaartxiprovince,Xi'an710003,Shaanxi,CHINA【Abstract】ObjectiveToestablishaconvenientmethodofseparationandcultivationofmouseperitonealmaerophages．MethodsAbdominalcavityweredouchedusingRPMI1640mediunwithoutserum，were
4、isolatedandobtainedmouseperitonealmaerophages，andthecellswereculturedinRPMI1640mediunwith10％fetalbovinese-rum．Thecellswereidentifiedbymorphologicalobservation，trypanbluestaining，Wright’Sstainingandphagocytosis．ResultsInthisexperiment,theobtainedwerehighlypurifiedmacrophageswi￡hmorphologiccharac
5、teristicsOfthemacrophageinorganism，favourablephagoeytosis．ConclusionThiswasasimpleandpragmaticmethodforsepara-tionandcultivationofmouseperitonealmacrophages．【Keywords】Mouse；Macrophages；Isolationandcultivation；Identification巨噬細(xì)胞是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要細(xì)胞成分，它在抗1．3小鼠分離、培養(yǎng)將小鼠頸椎脫臼法處感染、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)中起著非常的重要作用n～1。巨死，用70
6、％酒精消毒小鼠腹部皮膚，然后讓其仰臥位噬細(xì)胞來源于骨髓，它在機(jī)體中分布廣泛，主要分布于四肢展開，固定于解剖板上，無菌條件下打開小鼠肝、脾、淋巴結(jié)、骨髓、胸腺、胸腔、腹腔、血液、皮膚等多種腹腔，用眼科鑷提起下腹皮膚，剪一小口，并沿腹中組織器官。如何這些組織器官中分離、純化獲得高純線剪開3～5cm長(zhǎng)的腹部皮膚，充分暴露腹膜，向腹腔度、高活性的巨噬細(xì)胞，如何選擇適當(dāng)?shù)募?xì)胞提取及鑒注射預(yù)冷的不含小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)液5ml，定方法是體外細(xì)胞培養(yǎng)研究工作者的首要任務(wù)。本實(shí)注意進(jìn)針勿過深，不要損傷內(nèi)臟及血管，輕柔腹部約驗(yàn)以小鼠腹腔巨噬細(xì)胞為研究對(duì)象，探索建立一種巨噬2～3min，靜置5
7、min后用鑷子提起腹膜，用吸管吸取細(xì)胞體外分離培養(yǎng)與鑒定的簡(jiǎn)便方法。腹腔灌洗液，并重復(fù)灌洗一次。將兩次回收的的灌洗1材料與方法液4℃離心，所得細(xì)胞沉淀用預(yù)冷RPMII640培養(yǎng)液1．1主要試劑與儀器RPMI1640培養(yǎng)液，10％洗滌，l000r／min離心10min兩次，棄去上清，將沉淀胎牛血清，瑞氏染液，臺(tái)盼藍(lán)染液，印度墨汁，二氧化細(xì)胞再加人預(yù)冷RPMI1640培養(yǎng)液(青霉素100U／ml、碳培養(yǎng)箱，倒置顯微鏡，TDL湘儀離心機(jī)。鏈霉素100lxg／ml
