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《小鼠腹腔巨噬細胞的快速提取及培養(yǎng).pdf》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在行業(yè)資料-天天文庫。
1、·130·局解手術(shù)學(xué)雜志2015年第24卷第2期JREGANATOPERSURG，2015，V01．至．至小鼠腹腔巨噬細胞的快速提取及培養(yǎng)范仕郡，劉鑫，黃敏，王寧，鄭江(第三軍醫(yī)大學(xué)西南醫(yī)院中心實驗室，重慶400038)[摘要]目的建立一種小鼠腹腔巨噬細胞快速提取的方法，為細胞實驗提供便捷。方法用生理鹽水灌洗小鼠腹腔，分離獲取小鼠腹腔巨噬細胞，轉(zhuǎn)入高糖DMEM培養(yǎng)液中培養(yǎng)。采用臺盼藍染色計算存活率，瑞氏染色計算純度，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)。結(jié)果獲得較高純度的巨噬細胞，具備巨噬細胞的形態(tài)特征。結(jié)論本方法是
2、一種簡便實用的提取小鼠腹腔巨噬細胞的方法。[關(guān)鍵詞]BALB／c小鼠；巨噬細胞；提取；培養(yǎng)；鑒定[中圖分類號]Q813．1[文獻標識碼]A[文章編號]1672-5042(2015)02-0130-02EstablishmentofarapidmethodfortheisolationofmurineperitonealmacrophagesFANShi-jun，LIUXin，HUANGMin，WANGNing，ZHENGJiang(CentralLaboratory，SouthwestHospital，
3、ThirdMilitaryMedi—calUniversity，Chongqing400038，China)Abstract：ObjectiveToestablisharapidmethodfortheisolationofmurineperitonealmacrophages．MethodsAbdominallavagewasperformedwithNSandtheperitonealmacrophageswaspurifiedfromthelavage，whichwaslatertransferr
4、edintohighglucoseDMEMcnl—turemedium．Cellviabilitywasmeasuredviathetypanbluestaining．PuritywasobservedviaWrightgstain．ResultsHighpuritymacropha—geswithtypicalmorphologywereobtained．ConclusionAsimpleandrealisticmethodwassetupfortheisolationofmurineperitone
5、almac—rophages．Keywords：BALB／cmice；macrophage；extraction；culture；identification巨噬細胞是一類重要的天然免疫細胞，來源于外京華阜康生物科技股份有限公司提供)、生理鹽水、膠頭滴管、周血中的單核細胞，具有吞噬降解細菌、釋放炎癥介75％乙醇、眼科剪、眼科鑷、10mL一次性注射器、50mL離心管、臺盼藍、瑞氏染液、奧林巴斯IX71倒置顯微鏡、奧林巴斯質(zhì)、介導(dǎo)炎性細胞趨化、抗原提呈等活性，在抗感染、抗E400顯微鏡、細胞培養(yǎng)箱等。腫瘤免
6、疫中發(fā)揮著非常重要的作用。因此研究巨1．2實驗方法噬細胞的功能，對于深入理解機體免疫防御和免疫調(diào)1．2．1實驗準備將眼科剪、眼科鑷、膠頭滴管高壓滅菌；節(jié)機制具有重要意義。獲取原代細胞是體外研究巨噬離心管輻照消毒；BALB／c小鼠3只禁食8h；實驗前將超凈臺細胞功能的重要方法。巨噬細胞在肺、肝、腦等實質(zhì)器紫外線消毒30min。官以及腹腔等空腔部位以不同的形式分布。國內(nèi)外已1．2．2細胞提取將小鼠脫頸椎處死，并浸入75％乙醇中有不少文獻報道從多種組織器官中成功分離和純化巨10S。然后取出小鼠，瀝干，將其仰臥
7、于不銹鋼方盤上。用注射噬細胞。然而在實質(zhì)臟器中的巨噬細胞，往往受到器吸6mL生理鹽水液注入腹腔中，輕揉小鼠腹部2min，使液環(huán)境介質(zhì)中各種理化和生物刺激因素的影響，已發(fā)生體在腹腔內(nèi)充分流動。用眼科鑷提起下腹皮膚，使動物微傾向炎性活化或產(chǎn)生了定向分化，為其體外研究造成了干一側(cè)。剪開腹部皮膚后在肌肉層剪1個小口，用膠頭滴管將腹腔液吸出轉(zhuǎn)入離心管中。每只吸出量約為4～5mL。擾。而腹腔中存在大量靜息狀態(tài)的巨噬細胞，且腹腔1．2．3細胞培養(yǎng)在4℃條件下，將收集的腹腔灌洗液在中細胞種類較少簡單，易于分離，是獲取巨
8、噬細胞的常1000r／min條件下離心10rain，去上清，加入高糖DMEM細胞用部位-o。目前有關(guān)腹腔巨噬細胞的分離方法較為培養(yǎng)液用細胞計數(shù)板計數(shù)。顯微鏡下(10×100倍)計數(shù)巨噬復(fù)雜，且操作耗時較長。本方法在既往文獻報道基礎(chǔ)細胞。調(diào)整細胞濃度至所需，接種至細胞培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱上，對小鼠腹腔巨噬細胞提取方法加以改良，建立了一孵育4h，充分貼壁后，棄上清，除去非粘附細胞再加入高糖種更為簡便實用的小鼠腹腔巨噬細胞的提取方法。DMEM細胞
